サイクリンD1の新しいトランスクリプトbの機能解析

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670980
• 研究機関: 愛知県がんセンター
• 研究代表者: 細川 好孝 愛知県がんセンター, 化学療法部, 室長 (60229193)
• 研究分担者: 瀬戸 加大 愛知県がんセンター, 化学療法部, 部長 (80154665)
• キーワード: サイクリンD1 / マントル細胞性リンパ腫 / モノクローナル抗体 / 細胞周期

研究概要

我々が独自に単離したサイクリンD1トランスクリプトbの機能の解明をめざし、今年は以下の諸点を明らかにした。
1) サイクリンD1を過剰発現する30種の固型癌、血球系細胞培養株をRT-PCR,Northern blot法でスクリーニングした。その結果、t(11;14)を示すマントル性細胞腫瘍、多発性骨髄細胞腫瘍株で特異的にサイクリンD1トランスクリプトbが高発現していることを見いだした。さらに、トランスクリプトa,bを同時に認識するモノクローナル抗体を用いて、細胞内でトランスクリプトb蛋白産物を世界で初めて検出した。
2) 発現誘導系を用いたトランスクリプトbの機能解析。サイクリンD1トランスクリプトa,bのcDNAをLacoperator plasmidに挿入し、Lacrepressor vectorと供にマウスpro-B BAF3細胞に導入して、サイタリンD1トランスクリプトa,bを自由に発現誘導する系を樹立した。この系を用いてトランスクリプトa,b産物による細胞周期制御機構を検討いているが、予備的データとして、供にG1期を短縮することが判明している。
3) 免疫組織染色
我々は、すでにCyclin D1に対するモノクローナル抗体5D4を作製し、免疫組織染色を確立した。サイタリンD1がマントル細胞リンパ腫に特異的に強発現されており、診断に有用であることを示してきた。我々はトランスクリプトb産物のC末端側ペプチドを合成および融合蛋白質を発現させ、特異的抗体の作製中である。その半減期が長いと考えられるトランスクリプトb産物に対する特異抗体を用いて、リンパ腫検体を免疫染色し、予後との相関、悪性度との関連について検討する。

研究成果

• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "Cyclin D1/PRAD1/BCL-1 alternative transcript[b]protein product in B-lymphoid malignancies with t(11:14)(q13;q32)translocation." International Journal of Cancer. (in press). (1999)
• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "A small deletion in the 3'-untranslated region of cyclin D1/PRAD1/BCL-1 oncogene in a patient with chronic lymphocytic leukemia" International Journal of Cancer. 76. 791-796 (1998)
• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "Molecular Mechanism of Overexpression of Cyclin D1/PRAD1 in Human Tumor Cell Lines:Analysis of Allele-specific Expression." Gene Chromosome Cancer. 22. 66-71 (1998)
• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "Human Cyclin D1(PRAD1)Alternative Transcript b:Full-length cDNA CloningExpression in Breast Cancers." Cancer Letters. 113. 123-130 (1997)
• [文献書誌] Joh,T.et al.,: "Establishment of an inducible expression system of chimeric MLL-LTG9 protein and inhibition of Hox a7,Hox b7,and Hox c9 expression by MLL-LTG9 in 32Dcl3 cells" Oncogene.18. 1125-1130 (1999)
• [文献書誌] Akagi,T.et al.,: "Molecular Cytogenetic Delineation of the Break point at 18q21.1 in low-Grade B-Cell Lymphoma of Mucosa-Associated Lymphoid Tissue." Gene Chromosome Cancer.(in press). (1999)