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高アポBリポ1ンパク血症は動脈硬化の危険因子であり、その病因の解析は虚血性心・脳疾患の予防・治療に極めて重要である。我々は肝でのVLDL分泌の制御に着目して研究を行っており、本研究ではVLDLのアセンブリー・分泌過程におけるアポB糖鎖の役割の解明をめざす。アポBは4563アミノ酸の巨大なポリペプチドであり、ヒトアポB100には16カ所、そのN末48%に相当するアポB48には5カ所にN-型糖鎖の結合が確認されているが、その機能は未だ明らかではない。初年度の研究では、ラット初代培養肝細胞とC末端欠損ヒトアポBを導入したhepatoma細胞を用い、アポBの生合成と分泌過程での糖鎖の機能を糖鎖合成阻害剤tunicamycin(TM)を用いて解析した。アポB生合成([^<35>S]メチオニンのアポBへの取り込み)へのTMの影響はアポBの長さに依存し、ラット初代培養細胞でのアポB100・アポB48合成はそれぞれ85%・50%阻害された。阻害は経時的に増加し、翻訳直後の分解の進行が推定された。一方、C末端がさらに短縮されたヒトアポB42(アポBl00のN末端42%に相当)・アポB17(同17%)は全く影響されず、糖鎖が結合されないアポBの分解にはα2・β2ドメインの関与が推定された。パルス・チェイス実験を行い分泌への影響を解析したところ、アポB100の分泌はTMにより完全に阻害され、アポB48の分泌効率も65-80%低下した。アポB42・アポBl7の分泌もそれぞれ50%・70%阻害され、アポBの糖鎖は分泌過程で重要な役割を果たすことが明らかになった。N末端17%(アポB17)はアボB全長の翻訳・脂質との会合・分泌に重要な役割をもつが、このドメインの糖鎖(Asn158)の重要性が示唆された。
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