Fasを介するアポトーシスを応用した癌遺伝子治療へ向けての基礎的研究

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10671099
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 武田 泰隆 東京大学, 医科学研究所, 助手 (40163422)
• 研究分担者: 清水 本武 都臨床研, 化学療法部, 主任研究員 ; 松沢 昭雄 東京大学, 医科学研究所, 教授 (50012745)
• キーワード: 癌遺伝子治療 / Fas-FasLシステム / アポトーシス / マウス肝癌 / マウス乳癌

研究概要

本研究では、あまり解析の進んでいないFasを介するアポトーシスによる抗腫瘍作用について、Fasを発現していないマウス肝癌株MH134にベクターを用いてFas cDNAを導入したFas発現MH134細胞株(F6b株)を用いて研究を行ってきた。単クローン抗Fas抗体Jo2、及びアポトーシス誘導が証明されている精製可溶性リコビナントFasLを用いて、in vitro、in vivoで腫瘍のFasとFasLを介するターゲット治療の基礎研究を行った。
In vitro実験においてF6b株をJo2抗体と反応させて、その抗腫瘍効果をMTT assayにて検討したところ、200ng/mlでほぼ100%の細胞死を誘導した。この細胞死が実際にアポトーシスにより誘導された細胞死であることを蛍光核染色で確認した。同様にリコビナントの可溶性FasLを用いても、アポトーシスが誘導された。
In vivo実験では、宿主に対する抗Fas抗体とFasLの肝臓障害作用を回避するために、C3H-lpr/lprとC3H-gld/gldから、ダブルミュータントマウスC3H-gld/gld・lpr/lpr(C3H-gld/lpr)を作出し、これを用いて癌遺伝子治療実験を行った。マウス皮下にF6b株を移植してJo2抗体50μgを投与すると、一過性の腫瘍の縮小あるいは腫瘍発現の遅延がみられた。一方、マウス腹腔内にF6b株を移植してJo2抗体50μgを投与すると、有意の生存率延長がみられた。しかし、どちらも完全治癒はみられず、Fas発現のないJo2抗体に対し耐性の腫瘍細胞の増殖がみられた。可溶性リコビナントFasLを用いても、一過性の抗腫瘍効果はみられたものの、完全治癒は得られなかった。
今後は、宿主細胞傷害がないといわれているcell-bound FasLを用いての、正常マウスにおける抗腫瘍活性を検討し、臨床への応用をめざす。
また、正常ではFasの発現のみられないマウス乳癌MM2株にFas cDNAを導入したFas発現MM2細胞株(C8h株)を作成し同様の実験を行っている。さらに、最近、FasL発現腫瘍細胞が宿主に腫瘍特異的免疫を誘導するとの報告から、MH134及びMM2細胞にFasL cDNAを導入した細胞株を作成し、この抗腫瘍効果について検討を加える予定である。

研究成果

• [文献書誌] Takeda,Y.,Iguchi,T.and Matsuzawa,A.: "Apoptosis of pregnancy-dependent mammary tumor and transplantable pregnancy-dependent mammary tumor in mice." Anticancer Research. 17. 3885 (1998)
• [文献書誌] Takeda,Y.,Iguchi,T.Matsuzawa,A.: "Significant role of apoptosis in progression of hormone-dependent mammary and tumors in mice." Breast Cancer Research. (in press). (1998)
• [文献書誌] Yamamura,Y.,Sayama,K.,Takeda,Y.et al.: "Metallothionein expression in transplantable pregnancy-dependent mammary tumor lines in mice." Anticancer Research. 17. 3885 (1998)
• [文献書誌] Seino,K.,Iwabuchi,K.,Matsuzawa,A.et al.: "Chemotactic activity of soluble Fas ligand against polymorphonuclear leukocytes." J.Immunol.161. 4484-4488 (1998)
• [文献書誌] Shimizu,M.,Takeda,Y.,Matsuzawa,A.et al.: "Antitumor activity exhibited by Fas ligand (CD95L) overexpressing on lymphoid cells against Fas+ tumor cells." Cancer Immunol.Immunother.47. 143-148 (1998)
• [文献書誌] Shimizu,M.,Fontana,A.,Takeda,Y.,Yagita,H.,Yoshimoto,T.and Matsuzawa,A.: "Induction of antitumor immunity with Fas/APO-1 ligand (CD95L)-transfected : neuroblastoma Neuro-2a cells." J.Immunol.(in press). (1998)