| 研究課題/領域番号 |
10671223
|
|---|
| 研究機関 | 東邦大学 |
|---|
研究代表者 |
逸見 仁道 東邦大学, 医学部, 助教授 (90165514)
|
|---|
| 研究分担者 |
清水 教一 東邦大学, 医学部, 講師 (60256740)
辻田 和紀 東邦大学, 医学部, 助教授 (60130374)
|
|---|
| キーワード | ミスマッチ修復遺伝子 / hMLH1遺伝子 / 発現抑制 / microsatellite instability / 大腸癌 / 転写調節領域 / CpG island / hypermethylation |
|---|
| 研究概要 |
近年、多くのがん遺伝子やがん抑制遺伝子が同定され、これら遺伝子異常の累積が消化器癌、特に大腸癌の多段階発癌に重要な役割を演じていると考えられている。我々は遺伝子異常の蓄積を誘発する機構の1つとしてmismatch repair(MMR)systemの異常に注目し、MMR遺伝子の1つであるhMLH1遺伝子の転写調節機構に異常があることおよびその頻度がかなり高いことが予想される研究結果を得た。そこで本年度はhMLH1タンパク発現抑制機構を明らかにする目的で以下の実験を行った。
(1) hMLH1遺伝子上流域のmethylationと発現抑制の検討
a) hMLH1タンパク非発現ヒト大腸癌由来細胞株を脱メチル化剤azacytidineで処理し、hMLH1タンパク発現を調べたところ、脱メチル化された細胞では僅かではあるがタンパク発現が認められた。
b) 臨床検体のゲノムDNAを用いてhMLH1遺伝子上流域のCpG islandのmethylationをbisulfide法で調べたところ、hMLH1タンパク非発現例6例のうち1例でまた発現例5例のうち1例でhypermethylationが認められた。
これらの結果から多くの臨床例ではCpG islandのhypermethylationがhMLH1タンパクの発現抑制に関わっている可能性が低いことが示唆された。
(2) hMLH1遺伝子発現調節領域の特定
hMLH1遺伝子発現に必要な領域を特定化するために、上流域約1200から100bpの範囲を含むDNA断片をPCRにて増幅した。今後、これらのDNA断片をレポータープラスミド組み込み、レポーターアッセイを行う予定である。
|
