散発性大腸癌におけるhMLH1非発現機構の解明:転写因子の同定と検索法の確立

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10671223
• 研究機関: 東邦大学
• 研究代表者: 逸見 仁道 東邦大学, 医学部, 助教授 (90165514)
• 研究分担者: 清水 教一 東邦大学, 医学部, 講師 (60256740) ; 辻田 和紀 東邦大学, 医学部, 助教授 (60130374)
• キーワード: ミスマッチ修復遺伝子 / hMLH1遺伝子 / 大腸癌 / 転写調節領域 / reporter gene assay / 転写因子 / gel shift assay / in vivo footprinting

研究概要

近年、多くのがん遺伝子やがん抑制遺伝子が同定され、これら遺伝子異常の累積が消化器癌、特に大腸癌の多段階発癌に重要な役割を演じていると考えられている。我々は遺伝子異常の蓄積を誘発する機構の1つとしてmismatch repair(MMR)systemの異常に注目し、MMR遺伝子の1つであるhMLH1遺伝子の転写調節機構に異常があることおよびその頻度がかなり高いことが予想される研究結果を得た。そこで本年度は前年度に引き続きhMLH1遺伝子発現抑制機構を明らかにする目的で研究を行い、以下の結果を得た。
(1)発現調節領域の特定
reporter gene assayの結果、hMLH1遺伝子発現には上流域-301から-202までと-201から-76までの2つの領域が必須であることが判明した。活性の強さから前者はenhancer後者はbasic promoter領域であると考えられた。
(2)蛋白結合領域の同定と重要度の決定
in vivo footprinting法、転写因子コンセンサス配列の検索およびgel mobility shift assay等の結果より、上述の発現調節領域中には7箇所の蛋白結合部位が存在することがあきらかとなった。これらのうち、-212から-199、-145から-141、-125から-120までの3領域が転写活性に最も影響を与えることが明らかとなった。
(3)転写因子の同定
(2)で見いだされた重要領域に結合する蛋白が既知の因子であるかどうかを知る目的で、転写因子コンセンサス配列の検索およびgel mobility super shift assayを行った。その結果、これらの因子は未知である可能性が高いと考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Zhong X,Hemmi H,Koike J, et al.: "Various AGC repeat numbers in the coding region of the human transcription factor gene E2F-4."Hum Mutat (Online). 15(3). 296-297 (2000)
• [文献書誌] Yoshikawa K,Ogawa T,Baer R,Hemmi H, et al.: "Abnormal expression of BRCA1 and BRCA1-interactive DNA-repair proteins in breast carcinomas."Int J Cancer. 88(1). 28-36 (2000)
• [文献書誌] Watanabe Y,Haugen-Strano A,Umar A,Yamada K,Hemmi H,Takano S, et al.: "Complementation of an hMSH2-defect in human colorectal carcinoma cells by human chromosome 2 transfer."Mol Carcinog. 29(1). 37-49 (2000)
• [文献書誌] Guo RJ,Arai H,Kitayama Y,Igarashi H,Hemmi H,Hanai H,Sugimura H: "Microsattelite Instability of papillary subtype of human gastric adenocarcinoma and hMLH1 promoter hypermethylation in the surrounding mucosa."Pathol Int. (in press). (2001)
• [文献書誌] Miyafuji Y,Zhong X,Uchida I,Koi M,Hemmi H: "Growth inhibition due to complementation of a transforming growth factor-β receptor type II-defect by human chromosome 3 transfer in human colorectal carcinoma cells."J Cell Physiol. (in press). (2001)
• [文献書誌] Zhong X,Arita M,Koike J,Tsujita K,Hemmi H: "A single nucleotide polymorphism in the promoter region of the hMLH1 gene : Effect on transcriptional activity and application for a marker of detecting allelic loss."J Med Soc Toho. (in press). (2001)