|
有精卵から鶏胚の後肢の指間組織とそれ以外の組織に分離した。0.5%トリプシン溶液で4℃で20分間処理し、可及的に表皮を剥離し、その後、上皮結合組織を0.1%トリプシン・0.1%コラゲナーゼ溶液で37度で30分間処理し、細胞分散させた。これらの細胞を1.3×10_6細胞/cm2の濃度でLab Teck Chamberプレートに撒き、10%Fetal BOvine Serumと抗生物質(ペニシリン;100U/ml、ストレプトマイシン;100U/ml)を含むα-MEM培地で培養した。培養1日目に500ng/mlの法度のBMP-2を添加し、さらに2〜4日培養後、アルカリフォスターゼ(ALP)染色、アルシャンブルー染色を施した。軟骨細胞への分化の観察し、またアポトーシスの同定にはTunne法を行い検討中である。
|
