| 研究概要 |
マウス原始卵胞卵の凍結保存法に関し、至適凍結保護剤、凍結プログラムに関し検討することを最終目的として、今年度は、まずPMSGによる過排卵処置により得られた未成熟卵および成熟未受精卵の凍結保存法、融解後の胚発育能に関し検討した。蛍光色素によるdouble staining法(Propidium iodide,carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester)を用いた細胞の生存率、アポトーシス小体検出に関する検討では活性酸素消去酵素であるSODならびにNO消去剤であるヘモグロビンを耐凍剤として添加した場合、生存率、受精率が有意に向上した。また、受精後の胚発育能に対して成長因子の一種であるHB-EGFが促進的に作用すること、およびその効果はHB-EGFのsoluble formが主体であることを明らかにした。今年度得られた結果を基に、次年度は原子卵胞卵の凍結保存法、凍結融解後のin vivoにおける卵胞の発育能に関して、alginate beadsを用いマイクロカプセル化した卵胞の腹腔内同種移植とヌードマウス卵巣嚢内に移植した場合とで比較検討する予定である。さらに、凍結原始卵胞をラット腹腔内に移植し(異種間移植)、その後の発育に関し検討を進めるとともに、得られた成熟卵を体外受精後resipientに胚移植し胎仔を獲得する。また、in vivo,in vitroでの凍結融解後の原始卵胞の発育に関しgrowth differentiation factor-9(GDF-9)mRNAの発現を中心に検討し、卵胞成熟機構の一端を明らかにする予定である。また、正常胚発育の基本となる正常受精機構の解明のため、ヒト卵細胞膜の多精子受精防御機構に関する論文を発表した。
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