| 研究課題/領域番号 |
10671553
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
加藤 秀則 九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (60214392)
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| 研究分担者 |
和氣 徳夫 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (50158606)
加藤 聖子 九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (10253527)
西田 純一 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (40264113)
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| キーワード | 子宮内膜癌抑制遺伝子 / D1S459 / D1S225 / 748H11 / ヒト1番染色体 / 1q41-42 |
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| 研究概要 |
前回までの成果で子宮内膜癌抑制遺伝子は、D1S459〜225の領域に存在することが明らかとなった。D1S459〜225の領域はYACクローンのひとつである748H11でカバーされることも明らかにしている。748H11に含まれるBACクローンを得、HHUAに導入し、細胞死誘導活性を検討した結果、79%の細胞クローンに細胞死が誘導された。この値は完全長1番染色体やDIQ染色体を微小核融合でHHUA細胞内に導入したものと同等であった。この活性をもったBACクローンからpusfield電気泳動法を用いてできるだけ純粋なDNAを出し、適当な制限酵素で消化し数KbのDNA断片にした。このDNA断片をbiotinにて標識し、我々が作製した正常子宮内膜cDNAライブラリーと液相にてハイブリダイズしたのち、biotin標識されたDNA断片をFe-avidinビーズと結合させ、これをマグネット下で保持し、ハイブリダイズしなかったcDNAを洗い流した。ライブラリーの各クローンには前もって両端にリンカープライマーが付加されている。ハイブリダイズしたcDNAをこのリンカープライマーに相補的なプライマーでPCRにより二次にわたる増幅をかけ、このBACクローンにコードされるcDNA群を得た。
このcDNA群を再度元のBACあるいはYACクローンとハイブリダイズさせ真にこの領域に含まれるcDNAを現在3個程得ている。このうちひとつに癌組織での高率な塩基配列変異が観察され、現在さらに詳細な検討を行っているが、このクローンが目的の遺伝子である可能性が高い。
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