|
小眼球や白内障の原因を探る研究は、それらの予防や治療法の開発に必須であると同時にレンズ分化過程と細胞形態形成を分子レベルで理解する上で重要であり、この研究計画もその一環と位置づけられる。本研究では変異γE-クリスタリンがどのような機構で細胞の分化異常を起こすのかを検索し、まだ知られていないγ-クリスタリンの新しい生理的意義を探りだすことを目的とした。またレンズフィレンシンは、レンズ形態形成に関わると同時にCP49やαクリスタリンと「ビーズ状線維」を形成しレンズ透明性の維持に関わると考えられている。フィレンシンの遺伝子異常は、ヒトや実験動物でまだ報告がないが、最近CP49の変異によるヒト家族性白内障が報告されたことで、フィレンシンでも同様に遺伝子変異が白内障の直接的な原因となることが強く示唆される。小眼球や白内障の一次的な要因は多岐と考えられるが、その発症を統一的に理解するために、フィレンシン遺伝子の発現機構を知ることを目的とした。
(1)変異γE-クリスタリンcDNAを組み込んだプラスミドpEGFP-γEloを英国Dr.Quinlanと共同で開発した。このベクターをレンズ培養細胞に導入したところレンズにアミロイドが形成された。(2)フィレンシン遺伝子の5′-上流域をクローニングし、次にその最短配列を決定しプロモータ「活性コア」と定義した。「活性コア」をルシフェラーゼ遺伝子の上流に入れ込んだレポータプラスミドを作成し細胞に導入したところ非レンズ株細胞でも活性を示した。レンズ特異発現を司る配列の存在が示唆され、約6.5Kb上流の領域に断片S12(1.7kb)を見つけた。その活性化能は挿入の方向や位置に関係なく、またSV40プロモータやHSV-TKプロモータも活性化した。S12の塩基配列を決定し、ヒトの配列と比較したところ、周囲に比べて有意に相同性が高いことが判明した。
|
