| 研究課題/領域番号 |
10671711
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| 研究機関 | 明海大学 |
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研究代表者 |
羽毛田 慈之 明海大学, 歯学部, 助教授 (90164772)
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| 研究分担者 |
久米川 正好 明海大学, 歯学部, 教授 (40049367)
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| キーワード | 破骨細胞 / 骨吸収 / Tyro-3 / Gas6 / トランスフェクション / Quantitative RT-PCR / Tyrosine phosphorylation |
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| 研究概要 |
平成10年度
I. Tyro-3のリガンドであるGas6の成熟破骨細胞の骨吸収活性に対する作用の解析
Tyro-3のリガンドであるGas6が、どのように成熟破骨細胞の骨吸収活性に直接作用するかを純粋成熟破骨細胞の象牙片上での培養系を用いて検討した。純粋成熟破骨細胞はウサギ長管骨から調整した末分画骨細胞をコラーゲンゲル上に播き込み、プロナーゼ、コラゲナーゼなどの酵素硝化の後、純粋破骨細胞のみを回収し、象牙片上で培養した。Gas6は0.3nMから有意に破骨細胞の骨吸収活性を促進し、その促進作用はCas6添加6時間ですでに現れ少なくとも24時間まで持続した。
II. ウサギ成熟破骨細胞に発現する受容体型チロシンキナーゼTyro-3遺伝子の塩基配列の解析
ラビット破骨細胞のcDNAライブラリーから、Tyro-3特異的RT-PCR primerを用いRT-PCRを行いTyro-3 cDNA断片(650bp)をサブクローニングした。そのウサギTyro-3の塩基配列はヒトおよびラットTyro-3の配列とそれぞれ92%および93%のホモロジーを示した。また、ラットTyro-3の全長cDNAからキナーゼドメインを削除したドミナント・ネガティブTyro-3の作製を試みたが、フレームシフトを起こしたものしか得られていず、現在もドミナント・ネガティブTyro-3の作製を継続している。
III. 成熟破骨細胞におけるTyro-3の発現の確認およびその発現に対する各種ホルモン・局所因子の制御
成熟破骨細胞におけるTyro-3の発現を抗Tyro-3抗体を用いた免疫染色で確認した。また、Tyro-3の発現は破骨細胞の前駆細胞には存在せず成熟した破骨細胞に強く発現することが明らかとなった。
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