| 研究課題/領域番号 |
10671743
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
機能系基礎歯科学
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
岡田 幸雄 長崎大学, 歯学部, 助教授 (60136687)
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| 研究分担者 |
藤山 理恵 長崎大学, 歯学部, 助手 (10274664)
宮本 武典 長崎大学, 歯学部, 助手 (10167679)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 2000
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| キーワード | 味細胞 / サッカリン / GTPγS / ホスホリパーゼC / パッチクランプ / ウシガエル / イオンチャネル / 情報伝達 |
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| 研究概要 |
実験にはウシガエルを用いた。脊髄を破壊した動物から舌を摘出し多数の味覚円盤を切り出した。酵素処理により単離味細胞を得た。パッチクランプ法の全細胞記録法を用いて膜電位を固定し、味刺激で誘発される膜電流を記録した。両側の舌咽神経を切り出し、その内1本を双極の銀線上に置き流動パラフィンに浸し、神経インパルスを記録した。
舌を正常外液で順応後、正常外液に溶かしたサッカリンで刺激すると、舌咽神経は一過性のインパルス発生を示した。サッカリンの濃度に依存して味神経応答の大きさは増大した。3mMサッカリンと0.3mMキニーネに対する味神経応答の交叉順応実験を行った。双方の応答の大きさは、正常外液順応後の大きさとほぼ等しく相互に干渉しなかった。従って、カエルは、サッカリンとキニーネを異なる味質として識別しているものと考えられた。
10mMCl^-を含む電極内液で膜を破り全細胞固定の状態にして44個のロッド型細胞を30mMサッカリンで刺激すると、-50mVの保持電位で10個の細胞(23%)が10pA以上の内向き電流を示した。このサッカリン感受性を示す10個の細胞の内、6個の細胞は一過性の応答を示したが、他の4個の細胞は持続性の応答を示した。
G蛋白の阻害剤であるGTP-β-S(0.5mM)を電極内液に加えると、16個のロッド型細胞は全くサッカリン応答を示さなかった。電極内液にIP_3リセプターの阻害剤であるヘパリン(1mg/ml)を加えると、ロッド型細胞のサッカリン応答は強く抑制され、1個の細胞だけがサッカリンによる内向き電流を示した。また、電極内液に50 MIP_3を加えて膜を破ると、13個のロッド型細胞の内5個(38%)が内向き電流を示した。しかしながら、Gαqと共役するホスホリパーゼCの活性化剤であるPasteurella multocida毒素の細胞内灌流は何の応答もロッド型細胞に誘発しなかった。
以上の結果より、カエルのサッカリン応答においては、Gαq以外のG蛋白が関与してIP_3濃度を上昇させカチオン電流を誘発するものと考えられる。
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