| 研究概要 |
TIMPsがmatrix metalloproteinases(MMPs)に共通の内因性インタビターであることはよく知られている.一方,最近TIMPsがインヒビターとしての機能とは独立して,広範囲の細胞に対し強い増殖因子活性を持つことが明らかにされている.我々はTIMPsが破骨細胞形成の促進にも関与していることを明らかにしたので報告する.
1. TIMPs(-)FCSの調整
FCSに含まれるTIMP-1およびTIMP-2は抗TIMP-1抗体及び抗TIMP-2抗体アフィニティカラムで除去した.
2. マウス骨髄細胞培養系
雌6週齢のddYマウスより骨髄細胞を採取した後,細胞数を1×10^6 cells/mlに調整し,TIMPs(-)FCSを10%の濃度でα-MEMに加え,破骨細胞形成促進因子と共に5%CO2存在下37℃にて6日間培養した.培養後,酒石酸抵抗性酸フォスファターゼ(TRACP)染色を行い,TRACP陽性で3核以上の細胞を破骨細胞[TRACP(+)MN細胞]として計測し対照すなわちTIMP-1,2を除去していないFCS群[TIMP(+)FCS]と比較した.さらに,TIMPs(-)FCSにリコンビナント(r)TIMP-1,2を加えた群[rTIMP-1,2(+)FCS]を用いて同様の実験を行った.破骨細胞形成促進因子としては,PGE2を用いた.
【結果】TIMP(+)FCS,PGE2(+)群は52.67±9.67のTRACP(+)MN細胞を形成した.これに対しTIMPs(-)FCS,PGE2(+)群では13.33±5.65と有意にその形成が抑制された.一方,rTIMP-1,2FCS(+),PGE2(+)群では40.00±6.05とTIMP(-),PGE2(+)群より有意に回復した.
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