| 研究概要 |
1)Delta-9-tetrahydrocannabino(THC)及びその水酸化代謝物のアセチル誘導体を合成し、ES46.5Kによる加水分解の基質特異性を検討した。ES46.5Kは部位および立体選択的にTHC代謝物エステルを加水分解した。
2)ES46.5Kは、アセチルアミノフルオレン、フタル酸エステル、コカイン、ヘロイン等を効率よく水解し、生体異物の解毒機能を有することが明らかとなった。
3)ES46.5Kについては、構造類似性が知られているヒトのアセチルアミノフルオレン脱アセチル化酵素(AAF-DAC)cDNAを鋳型としてPCRを行い、その生成物を解析、これを利用してES46.5Kのクローニングを行っている。
4)Natural cannabinoids(cannabidiol, THC, cannabinol)及びTHC代謝物(11-OH-THC,11-oxo-THC等)がマウス脳ミクロソームのanandamide amidohydrolaseを阻害することが明らかとなった。
5)Anandamide amidohydrolaseをマウス肝より精製し、その触媒活性、阻害剤の影響等の酵素化学的緒性質を検討した。また、anandamide amidohydrolaseが生体内においてanandamideの作用発現を調節している重要な酵素であることを明らかにした。
6)マウス肝anandamide amidohydrolaseのアミノ酸配列に対応するペプチドフラグメントを合成し、ウサギに免役し、抗体を得た。調製した抗体は、マウス脳及び肝ミクロソームの酵素を認識し、本酵素の機能解析に用いる有用なプローブになることが明らかとなった。
7)マウス肝cDNAライブラリーを2)で調製した抗体を用いてスクリーニングを行い、陽性クローンを得た。現在解析中である。
8)AnandamideとTHC及び活性代謝物(11-OH-THC,11-oxo-THC)の薬理作用(カタレプシー惹起及び体温下降作用)において、耐性、交叉耐性並びに相互作用が認められた。
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