ATバリアントの細胞工学的手法を応用したポジショナルクローニング

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10672136
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 松浦 伸也 広島大学, 原爆放射能医学研究所, 助手 (90274133)
• 研究分担者: 田内 広 広島大学, 原爆放射能医学研究所, 助手 (70216597) ; 小松 賢志 広島大学, 原爆放射能医学研究所, 教授 (80124577)
• キーワード: Nijmegen breakage症候群 / Ataxia-telangiectasia / 染色体不安定症候群 / NBSI / 8q21 / DNA修復 / テロメア / 減数分裂

研究概要

Nijmegen breakage症候群(NBS;ATバリアント)は小頭症と発育遅滞、特異顔貌を特徴とする染色体不安定症候群である。患者由来の細胞は、電離放射線高感受性と染色体不安定性、細胞周期チェックポイントの異常を示すことが知られていたが、その原因遺伝子に関してはごく最近まで染色体座位さえ明らかにされていなかった。
我々は、ホモ接合体マッピング法を用いて候補領域を8番染色体長腕のD8S273からD8S1822までの7cMの領域に限局した。さらに、NBS4家系と6例のハプロタイプを分析して、NBS創始者ハプロタイプをD8S271からD8S270までの1cMの領域に同定した。次に、D8S271からD8S270までの領域をカバーする約4MbのYACコンティグを作成し、それぞれのYACクローンをスフェロプラスト融合法でNBS細胞に導入して、放射線感受性を指標に相補性試験を行った。その結果、YAC759G8導入クローンは放射線抵抗性に変化することが判明し、NBS原因遺伝子を800-kbに最小化した。最終的に、この領域をカバーするBACコンティグを構築し、そのほぼすべての塩基配列を決定してコンピュータープログラムで原因遺伝子の探索を行ったところ、患者にのみ変異の見られる遺伝子NBS1を発見した。NBS1はDNA二重鎖切断修復や細胞周期チェックポイントに関わるだけではなく、減数分裂やテロメアの維持などさまざまな生体の重要な機能に関与していることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] H.Tauchi, et.al.: "Sequence analysis of an 800-kb genomic DNA region on chromosome 8q21 that contains the Nijmegen breakage syndrome gene, NBSI" Genomics. 55. 242-247 (1999)
• [文献書誌] T.Hiramoto, et.al.: "Mutations of novel human RAD54 homologue, RAD54B, in primary cancer" Oncogene. 印刷中. (1999)
• [文献書誌] A.Nakamura, et.al.: "Four novel mutations of Fanconi anemia group A gene (FAA) in Japanese patients" J.Hum.Genet.44. 48-51 (1999)
• [文献書誌] S.Matsuura, et.al.: "Positional cloning of the gene for Nijmegen breakage syndrome" Nature Genet.19. 179-181 (1998)
• [文献書誌] K.Matsuura, et.al.: "Radiation induction of p53 in cells form Nijmegen breakage syndrome is defective but not similar to ataxia-telangiectasia" Biochem.Biophys.Res.Commun.242. 602-607 (1998)
• [文献書誌] K.Komatsu, et.al.: "Radiation induction of p53 in cells from Nijmegen breakage syndrome and functional mapping of the underlying gene at 8q21" Disease Markers. 14. 26-27 (1998)