| 研究概要 |
水棲生物のミジンコを用いて、環境毒性物質の影響を高感度で効率的にモニタリングするための新規な手法を開発する目的で、DNA損傷性を指標にした評価法の基礎データを取った。DNA損傷性を高感度で検出するために、染色体のDNA鎖切断を電気泳動のパターンで検出するコメットアッセイ法の適用を検討した。
前年度に検討した方法でミジンコの成体をホモジナイズして核分画を調整した。得られた核分画をアガロースに包埋し、電気泳動してDNA損傷をもつ核のコメット像を観察した。その結果、DNA損傷をもつ核の出現頻度は無処理対照では3.6%であった。ミジンコを人工飼育水中で変異原のメタンスルホン酸メチル(MMS)で30分間処理してコメットアッセイをおこなった。5μg/ml,20μg/ml処理群では各々7.0%,8.2%であったが、50μg/ml処理群では22.7%と明らかに高い値が得られ、この方法でMMSのDNA損傷作用が検出できた。
今後、核分画調整時の回収率を精精度を上げるための検討と、対照群におけるDNA損傷をもつ核の出現頻度を低くするために、標本作成過程における温度,光の影響について詳細な検討が必要であると考えられた。また、MMS以外の種々のアルキル化剤で処理したミジンコについてもコメットアッセイを行って有用性を明らかにする必要がある。
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