研究概要 |
チトクロムbc_1複合体はミトコンドリア呼吸鎖においてユビキノールからチトクロムcへの電子伝達を行うとともにプロトンの能動輸送を行う異なる11種類のサブユニットからなる巨大膜たんぱく質複合体である。本酵素の原子レベルでの反応機構を解明するには、高分解能でのX線結晶構造が必須である。それとともに本酵素の組成性質を正確に把握しておく必要がある。 本研究では、酵素を安定化し結晶化に最も適した界面活性剤の種類の検索をまず詳細に行った。疎水部の末端に環状構造をもつシクロヘキシルヘキシルマルトシド(Cymal6)とシクロヘキシルブチルマルトシド(Cymal4)を混合した標品から得られた六方晶系結晶は不凍剤(グリセロール)へのソーキングに対して強かった。凍結条件でX線回折データの収集を行ったところ、c軸方向で2.4A、ab軸方向で2,7A分解能でのデータをSPring-8において収集することができた。また、呼吸阻害剤であるミキソチアゾール、スティクマテリン、アンチマイシンAを結合させた酵素から得られた結晶についてもX線回折データの収集を行った。 結晶標品を用いて質量分析を行い各サブユニットの分子量を測定誤差0.1%以下で正確に決定するとともに含有脂質およびQ_<10>量についても分析を行った。
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