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1、 Green Fluorescent Protein(GFP)tagを用いた細胞内RAD51の動態の変化の観察と機能ドメインの同定。
RAD51蛋白はS期特異的な核内点状体を形成し、DNA組換えばかりでなく、複製との関与が示唆されている。本申請者はGFPtagをRAD51蛋白に付加することよって、生きた細胞のままRAD51蛋白を観察することが可能なことを報告している。この方法を用いてRAD51機能ドメインの異常蛋白のいくつかで、細胞内での発現様式を検討した。その中で特に注目すべきは、ATP結合ドメイン置換蛋白で核内網状構造体を形成したことである。このことから、RAD51機能の活性化にはATPが必須で、これがないとRAD51は不活性化し、自己重合した貯蓄型として核内に蓄積することが示唆された。
2、 RAD51結合蛋白の機能解析。
RAD51結合蛋白RAB22は新規の分子で、RAD51と局在が一致する核内点状体を形成する。mRNAの発現パターンもRAD51と完全に一致し、同様の機能を有するものと考えられる。RAB22分子の機能をさらに詳細に解析するために、この遺伝子を欠損したマウスES細胞株を作製した。この細胞株では、予想された放射線・アルキル化剤感受性は認められなかった。さらに個体レベルでの解析をするために、遺伝子ターゲテイングマウスを作製した。現在、詳細な解析を進めているが、今までのところ免疫系などの異常は認められていない。
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