| 研究概要 |
Mesp2の発現は体節形成期に特異的に観察されるが、Mesp1は体節形成期に加えて、原腸陥入期にも、発現する。我々はすでにMesp1遺伝子をMesp2遺伝子座にノックインすることにより、Mesp2の欠損がレスキューされMesp1も体節形成期にMesp2と同様の機能をもつことを明らかにしている。そこでこれらの遺伝子の機能を明らかにするためには両者を体節形成期にのみ特異的に欠損させる必要がある。そのためにcre-1oxを用いた系を利用する。まず、Mesp1(十/-)のES細胞のMesp2遺伝子座にcre遺伝子を導入したマウス、及びMesp2(十/-)のES細胞のMesp1遺伝子座に1oxを導入したマウスの作製を試みた。これはこの2つの遺伝子が同じ染色体に隣同士にならんでいるため、このような工夫が必要となる。今年度はこれらのES細胞を形成し、同じ染色体上の遺伝子に変異が導入されたことを、FISH解析により確認した。現在これらのES細胞から作製されたキメラマウスを多数得ており、これらの動物の掛け合わせにより、目的とする、体節形成期にのみ両方の遺伝子が欠損したマウスが得られる予定である。このマウスの解析により、これらの遺伝子の体節の分節化における機能がさらにあきらかにできると考えている。またMesP2遺伝子の異所的発現による機能解析も試みている。体節形成直前で発現を開始し、分節化と同時に発現が失われるMesP2を持続的にまたは異所的に発現させるために、同じ体節中胚葉で分節前から持続的に発現するMox-1,および分節直後から持続的に発現するMox-2遺伝子座に、Mesp2をノックインしたES細胞を作製した。現在Mox-2にノックインしたマウスが形成されており、解析を開始したところであるが、興味深いことに、ヘテロのノックインマウスの数が異常に少ないことがわかってきた。現在その異常がどこに現れているのかを解析中である。またMox-1にMesp2をノックインしたES細胞を用いてキメラマウスの作製をこころみているが、今の所、まだ1匹もキメラマウスが得られておらず、耐性致死になっている可能性が高い。現在別のES細胞クローンを用いて確認の実験をすすめている。
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