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Ca^<2+>/カルモジュリン依存性プロテインキナーゼII(CaMKII)は、中枢神経系に豊富に存在する多機能型のプロテインキナーゼとして、神経活動の制御やシナプス可塑性に深く関わると考えられている。本研究においては、CaMKIIの主要なサブユニットであるαの遺伝子に"点変異"という機能的な欠損を導入したマウスを作製することにより、生体内におけるCaMKIIの果たす役割について新たな知見を獲得することをめざしている。具体的には、CaMKIIαサブユニットの活性中心である42番めのリジン残基(Lys-42)をアルギニン(Arg)に置換した、不活性型のαCaMKII(Arg-42)変異マウスの作製を試みている。これによって、αCaMKIIの蛋白分子としての役割とプロテインキナーゼ活性の果たす役割とを区別して評価することが可能になるものと期待される。
本年度は、昨年度までに完成させた点変異を含む相同組み換え用のターゲッティングベクターをエレクトロポレーションによってES細胞に導入した。G418薬剤耐性を指標に合計410個のES細胞クローンを選択し、PCRによるスクリーニングと、サザンブロットによる相同組換えの確認を行い、さらには点変異を含む遺伝子部分のPCR産物の制限酵素処理と同産物の核酸配列の決定によって点変異の存在を確認し、最終的に3個の陽性細胞株を得た。
引き続き、これらの細胞株をマウス8細胞期胚にマイクロインジェクション法によって注入し、キメラマウスを作製し、それらを交配することにより、αCaMKII遺伝子変異マウスを完成させ、その機能解析を行う予定である。
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