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1.レンサ球菌サイクリックADPリボース(cADPR)合成・分解酵素遺伝子をクローン化・発現させた大腸菌をマウスの腹腔内に生菌投与したが、コントロールに比較して特別な所見(病的所見)は観察できなかった。ひき続き投与を継続し、観察を続ける予定である。
2.酵素活性部位に関する解析および活性低下・消失酵素の生体に対する影響を検討するために、レンサ球菌cADPR合成・分解酵素変異体を作製した。欠失変異体は野生遺伝子を制限酵素処理とリンカーの導入にて作製し、点変異体は変異導入オリゴヌクレオチドを用いたPCR法にて作製した。発現は抗レンサ球菌cADPR合成・分解酵素抗体によるウェスタンブロット、酵素活性は蛍光法によるNAD分解活性にてスクリーニングし、必要に応じて放射同位元素標識NADによる酵素活性を解析した。解析の結果、(1)変異体の種類によっては遺伝子・遺伝子産物の低発現・不安定性などのために構造機能連関の解析が困難であること、(2)酵素分子内の一部分を欠失させた変異体でもNAD分解活性を有することが明らかになった。また、(3)アミノ酸置換によりNAD分解活性の低下した点変異体作製に成功した。現在、さらに異なるアミノ酸置換を行い、酵素活性の変化を検討する予定である。そして、その変異体を用いて、変異体酵素の生化学性状の解析、実験動物を用いての病原性に関しての野生遺伝子クローン株との比較検討を計画中である。
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