血管内皮細胞カドヘリン複合体結合蛋白質の同定と生理機能の解明

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10770308
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 平野 勝也 九州大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (80291516)
• キーワード: 血管内皮細胞 / 細胞間接触 / 増殖制御 / 接触抑制 / 脱リン酸化酵素 / 細胞周期 / サイクリン依存性キナーゼ

研究概要

細胞間接触による血管内皮細胞増殖の抑制は、内皮細胞を機能的成熟に導く重要な機構である。本研究では、(1)細胞間接触の受容から核における増殖制御に至る細胞質及び核内シグナル伝達系(Ca情報、蛋白質リン酸化あるいは脱リン酸化酵素、転写因子、細胞周期制御蚤白質など)を分子細胞生物学的に解明すること、(2)細胞接着因子の一つ内皮型カドヘリンとその機構複合体の形成に関与する構造を、ツーハイブリッド法を用いて明らかにすることを目的として研究を行った。
1.培養内皮細胞の増殖及び細胞周期を、Bromod eoxyuridine(BrdU)の取り込みで評価する方法を確立した。コンフルエントの細胞は、BrdU陽性細胞の割合は0.1%であり、細胞間接触の完成した時期の内皮細胞は増殖を停止していることが明かとなった(Hirano et al.,1999)。
2.静止期にある培養内皮細胞及び生体内皮細胞(大動脈弁条片)における、Ca情報伝達機構を明らかにし、血管緊張調節における内皮細胞内Ca情報伝達の役割を明らかにした(Ihara et al.,1999;Kawasaki et al.,1999)
3.内皮細胞cDNAライブラリーからミオシン脱リン酸化酵素調節サブユニット(MYPT1)をクローニングした (Hirano et al.,1999)。初めに平滑筋で同定されたMYPT1と相同性が高く、また、細胞増殖の停止に伴い細胞内局在が変化することを明らかにした(Hirano et al.,1999)。
4.静止期にある内皮細胞から作製したcDNAライブラリーから、サイクリン依存性キナーゼ阻害蛋白質p27^<kip1>の新規分子種を世界で初めて発見し、細胞間接触による内皮細胞増殖抑制に関与する核内情報伝達分子の一つを見出した(投稿中)。
5.内皮型カドヘリン、プラコグロビン、βカテニンを、内皮細胞ライブラリーからクローニングした。ツーハイブリツド法を用いて、プラコグロビン及びβカテニンとの結合に関与する内皮型カドヘリンの機能構造を明らかにした(投塙準備中)。

研究成果

• [文献書誌] Ihara E,Hirano K,et al.: "Thapsigargin-induced endothelium-dependent triphasic regulation of vascular tone in the porcine renal artery."British Journal of Pharmacology. 128. 689-699 (1999)
• [文献書誌] Kawasaki J,Hirano K,et al.: "Troglitazone inhibits the capacitative Ca^<2+> entry in endothelial cells."European Journal of Pharmacology. 373. 111-120 (1999)
• [文献書誌] Hirano M,Niiro N,Hirano K,et al.: "Expression,subcellular localization,and cloning of the 130-Kda regulatory subunit of myosin phosphatase in porcine aortic endothelial cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. 254. 490-496 (1999)
• [文献書誌] Zhou YB,Hirano K,et al: "NH_2-terminal fragments of 130 kDa subunit of myosin phosphatase increases Ca^<2+> sensitivity of the porcine renal artery"Journal of Physiology. 516. 55-65 (1999)
• [文献書誌] Zhou YB,Nishimura J,Hirano K,et al.,: "The exogenously added small subunit of smooth muscle my osin phosphatase increases the Ca^<2+> sensitivity of the contractile apparatus in the permeabilized porcine renal artery."Biochemical and Biophysical Research Communications. 254. 158-163 (1999)
• [文献書誌] Yasutsune T,Kawakami N,Hirano K,et al.: "Vasorelaxation and inhibition of the voltage-operated Ca^<2+> channels by FK506 in porcine coronary artery."British Journal of Pharmacology. 126. 717-729 (1999)