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1) ラット圧負荷肥大心モデルの作成二心肥大期モデルとしてWistarラットの腹部大動脈縮窄術を施行し、圧負荷心不全期モデルとしてDahl食塩感受性ラットを8%高食塩食にて飼育した。
2) 心機能評価:各圧負荷ラットにおいて動脈圧、心拍数を頚動脈留置カテーテルより経時的に測定し、心臓形態・収縮能・拡張能を経胸心エコーにて評価した。
3) 圧負荷心リモデリングの組織学的・生化学的観察:圧負荷ラットの各タイムポイントにおいてMillar micro-tip catheterを用いた血行動態測定後、心臓を摘出した。H-E染色・アザン染色にて心筋細胞肥大・心筋線維化を確認し、コンピューター画像処理にて肥大率・線維化率を定量評価した。また、一部の心臓サンプルはノザンブロットによるFibronectin.TypeI・IIIcollagenの定量評価に使用した。圧負荷による心筋細胞肥大と心筋間質の線維化・心筋細胞の脱落所見を組織にて観察し、左室拡張障害出現後に収縮不全を血行動態上観察され圧負荷ラットにおける心リモデリングを認めた。
4) 圧負荷心リモデリング過程におけるVEGFの関与:圧負荷ラットの各時期において心筋内VEGFの発現を抗VEGF抗体及び抗Flk-1/Flt-1抗体による免疫組織染色を施行した。心筋細胞肥大期において心筋内小血管周囲にVEGF・Flk-1の発現を確認したが起源細胞の同定をin situ hybridizationにより現在確認中である。また、不全期におけるVEGFは発現の減少をしめしている。現在、各時期におけるVEGF発現をノザンブロット・ウエスタンブロットにて定量評価中である。さらに、不全期の心筋において組織上内皮マーカー(Von Willebrand Factor)発現減少を認めた。
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