| 研究概要 |
1)抗ヘルペスウイルス1型チミジリン酸化酵素(TK)に対する兎ポリクローナル抗体の作製:ACV感受性ヘルペスウイルス1型(HSV-1TAS株)感染細胞から抽出したDNAをテンプレートにしてTK遺伝子を増幅し,そのDNA産物をフレームが合うようにしてpQE31ベクター(QIAGEN)に組み込み,大腸菌にHSV-1のTKを発現させた.発現したTKを精製し,兎を免疫して抗TK抗体を作製した.
2)組み換えTKポリペプチドののTK活性:HSV-1のTKはACV感受性ヘルペスウイルス1型(HSV-1TAS株)を含めて本来376個のアミノ酸(1131塩基)からなっているが,ACV耐性HSV-1TAR株は355番目以降のアミノ酸がフレームシフトをおこして,407個のアミノ酸からなっている.そこでHSV-1TAS株およびTAR株遺伝子から,以下の4種類の組み換えTKポリペプチドを上記と同様に作製した.(1)TAS株のN′-末端側から354個のアミノ酸からなるTK(TKSS),(2)TAS株TKのN′.末端側から376個のアミノ酸からなる正常なTK(TKS),(3)TAR株TKのN-末端側から376個のアミノ酸からなるTK(TKR),(4)TAR株TKのN′-末端側から407個のアミノ酸からなるTK(TKRL).これら組み換えポリペプチドを用いてTAR株TKのACVリン酸化能の低下に関する研究により,以下の事項が明らかになった.(1)TAR株感染・Vero細胞でTKは発現される.(2)TKSおよびTKSSは比較的親水性の性質を有するが,TKRおよびTKRLは完全に疎水性である.(3)TKSのTK(ACVリン酸化)活性に比較すると,TKSS,TKR,TKTLのTK(ACVリン酸化)活性は極端に低下する.以上の成績により,HSV-1のACVに対する感受性において,TKポリペプチドのC′-末端側の重要性が確認された.
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