アポトーシス抑制能を有する新しいプロテアーゼ抑制遺伝子のクローニング

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10770519
• 研究機関: 放射線医学総合研究所
• 研究代表者: 田野崎 栄 放射線医学総合研究所, 放射線障害医療部, 研究員 (70267186)
• キーワード: アポトーシス / プロテアーゼインヒビター / 白血病細胞

研究概要

我々はヒト白血病の形成機構にアポトーシスの観点から研究を進めた。同一白血病(FAB;MO)よりサイトカイン(IL3,SCF)依存性および自立性に増殖する白血病細胞2種類を樹立するのに成功した。この2細胞は形態的に観察すると、依存性細胞株は増殖するにもかかわらず全細胞の35%がアポトーシスの形態をとり死滅する。従って、自立性細胞株より増殖能が劣っていることが明らかになった。この2細胞間でmRNA発現程度に差がある遺伝子の同定を試みた。Differential display(DD)法にて解析したところ、自立性細胞に高発現を認めた遺伝子(R3-2)の一部(1.2kb)を同定しえた。このR3-2をプローブとして白血病細胞2種類につきNorthern法でも同様R3-2は自立性細胞に高発現(数100倍)を認めた。しかも、K562,HELおよびこの依存性細胞株はサイズが5.0kbであるが、自立性細胞株は4.5kbとサイズが変化していた。R3-2の一部(1.2kb)をホモロジー解析したところ,プロテアーゼインヒビターであるcalpastatinに62.3%ホモロジーを有していた。自立性細胞に高発現を認めたR3-2を既存のcalpastatinの塩基配列をもとにRT-PCRを行い塩基配列を随意時決定いていったところ、一部エクソンがスプライシングアウトしているcalpastatinのアイソタイプであることがわかった。現在このcDNA全長をクローニングしており、このcalpastatinアイソタイプの機能を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Inokuchi K,et al: "Establishment of a cell line with variant BCR/ABL breakpoint expressing P180BCR/ABL from late-appearing Philadelphia-positive acute biphenotypic leukemia." Genes,Chromosomes and Cancer. 23(3). 227-238 (1998)
• [文献書誌] Tanosaki S,et al.: "Relation between microsatellite instability and N-ras mutation and duration of disease free survival in patients with acute leukemia." Cancer. 83(3). 475-481 (1998)
• [文献書誌] Inokuchi K,et al.: "Minimal residual disease in acute myelogenous leukemia with PML/RAR alpha or AMLl/ETO mRNA and phenotypic analysis of possible T and natural killer cells in bone marrow." Leukemia and Lymphoma. 29(5-6). 553-561 (1998)
• [文献書誌] Inokuchi K,et al.: "Heterogenous expression of bcr-abl fusion mRNA in a patient with Philadelphia-chromosome-positive acute lymphoblastic leukaemia." British Journal of Haematology. 97(4). 837-840 (1997)
• [文献書誌] Futaki M,et al.: "Possible transforming activity of interferon regulatory factor 2 in tumorigenicity assay of NIH3T3 cells tranfected with DNA from chronic myelogenous leukemia patients." Leukemia Research. 20(7). 601-605 (1996)
• [文献書誌] Hanawa H,et al.: "Dual rearrangement of immunoglobulin and T-cell receptor genes in a case of splenic lymphoma with villous lymphocytes." Leukemia and Lymphoma. 18(3-4). 357-360 (1995)