| 研究概要 |
本研究は、in vitroで同定された癌間質反応抑制サイトカインを、分離した腹膜中皮細胞に遺伝子導入し、これを体腔内に移入することにより、癌の腹膜播種を制御するという、新しい生物学的治療法を目指すものである。今年度の研究成果の概要は以下の如くである。
1.Interferon-γ(IFN-γ)遺伝子プラスミドの調製:IFN-γcDNAを組み込んだプラスミド(pBC12/RSV/IFN-γ)をJohn Wayne Cancer Institute(USA)のDr.Hoonより供与された。これを大腸菌を用いて大量調製することができた。
2. 中皮細胞の機能解析とサイトカイン遺伝子導入:
1) 中皮細胞のサイトカイン発現プロファイル:手術時に採取した大網より中皮細胞を分離培養し、各種サイトカインmRNAの発現をRT-PCR法により解析した。その結果、IL-6,IL-8 mRNAは培養中皮細胞に発現していたが、IFN-γmRNAの発現はみられなかった。従って、非刺戟下の中皮細胞ではIFN-γは産生されていないことが分かった。
2) 癌細胞の接着、浸潤に対するmesothelial barrier functionの解析:ヒト大網より分離した中皮細胞を培養し、24ウェルプレートとフィルターカップを用いたin vitroの腹膜播種、浸潤モデルを作成した。
KATO-3胃癌細胞とのcocultureでは、中皮細胞層が存在すると、胃癌細胞の接着、中皮層を越えた浸潤が有意に抑制されることが分かった。これにより、癌細胞に対するmesothelial barrier functionの意義が明らかとなった。
3)中皮細胞へのサイトカイン遺伝子導入:培養中皮細胞にIFN-γプラスミドをlopofectin法により遺伝子導入した。RT-PCR法により、IFN-γmRNAの発現が確認された。現在、ELISAによりIFN-γの産生量を測定中である。
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