| 研究概要 |
本研究では、時期および部位特異的に選別した特定の分散培養神経細胞に外来遺伝子を導入し、その形質転換細胞を生体内や器官培養系に移植して導入遺伝子の効果を調べる方法を、既存の小脳スライス培養系に移植する系をモデル系として確立し、機能未知の遺伝子の役割を明らかにすることを目的としている。
1. まず移植細胞に対する遺伝子導入法としては、高効率かつ細胞に対するダメージが少ない方法が要求される。従来から高い効率を持つとされるリポソームを用いた方法に加え、最新の非リポソーム系試薬(Fugene,ロッシュ)を検討した。その結果小脳の分散培養細胞に遺伝子導入した場合、神経細胞に対する遺伝子導入効率および導入細胞の生存率はFugeneを用いた方法が約1オーダー高いことが分かった。
2. 移植細胞に導入する遺伝子としては、神経細胞の分化に関わると考えられる因子の遺伝子を導入してその働きを明らかにしたいと考え、近年発見されたC2HCタイプZnフィンガータンパク質Mytファミリー群に着目した。Myt1はアフリカツメガエルでは神経細胞の分化を促進する。またMyt2に相当するマウスのPng1は分裂停止後の神経細胞に広く発現する。申請者は、まずマウスのMyt1およびPng1遺伝子の発現時期および場所を詳しく検討するためにin situハイブリダイゼイション法でその発現を追跡した。まだ実験は進行中ではあるが、従来の指摘のように発生期だけではなく、Myt1およびPng1共に成体の一部神経細胞でも発現が認められることが分かった。またこの転写因子群の新たなメンバーであるMyt3のマウス・ホモログのクローニングを試みており、これらファミリー遺伝子群の発現と役割の相関関係を、in situハイブリダイゼイション法およびこの遺伝子導入細胞の移植法により明らかにしたいと考えている。
|
