| 研究概要 |
本研究の目的は、牛や犬に感染する住血原虫の主要抗原を検索し、それに対する各モノクロナル抗体(Monoclonal Antibody,Mab)を作成して、臨床獣医師が簡易で迅速に応用可能なバベシアおよびタイレリア科の住血原虫病の診断液を開発することである。
本年度は前年に作成した各Monoclonal Antibody(MAb)を供試した診断法(診断液)の開発を行った。得られた成績は次の通りである。
1.犬バベシア(Babesia gibsoni)MAbを用いた診断方法に関する検討
1)酵素抗体法(ELISA)を応用した診断法:犬バベシア虫体抗原としての30kDaおよび24.5kDaの蛋白抗原に対する各MAb(30kDa-bgMAb,24.5kDa-bgMAb)を用いたサンドウイッチELISA法では、何れも得意な反応成績を示した。このうち、30kDa-bgMAbを固相抗体として、また24.5kDa-bgMAbをビオチンと、さらにHRP-ストレプトアビジンで標識させたELISA法は、特異性と反応感度が最も高く、末梢血原虫感染率との相関性はr=0.879で高い相関性を示し、また感染率0.05%の血液でも明らかな陽性反応を示した。
2)ラテックス凝集反応:ラテックス粒子を感作させた各bgMAbを作成したラテックス凝集反応(試験管法)により、バベシア感染犬の血清中に出現するバベシア可溶性抗原の定量を試みた。末梢血原虫感染率との相関性はr=0.832で高い相関性を示したが、感染率0.05%以下では陰性を示した。
2.牛タイレリア(Theileria sergenti)MAbを用いた診断方法に関する検討
1)酵素抗体法(ELISA)を応用した診断法:牛タイレリア虫体抗原としての23kDaおよび32kDaの蛋白抗原に対する各MAb(23kDa-tsMAb,32kDa-tsMAb)を用いたサンドウイッチELISA法は、バベシアと類似の組み合わせで高感度で特異性の高い成績を得たが、原虫の検出感度は感染率0.1%以上であった。
2)ラテックス凝集反応:ラテックス粒子を感作させた各tsMAbを作成したラテックス凝集反応では、感染率0.2%以上で陽性を示した。
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