植物RNAポリメラーゼIII依存in vitro転写系の確立

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10874122
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 杉浦 昌弘 名古屋大学, 遺伝子実験施設, 教授 (80027044)
• 研究分担者: 杉田 護 名古屋大学, 人間情報学研究科, 教授 (70154474)
• キーワード: RNAポリメラーゼIII / in vitro系 / 高等植物 / U3 SnRNA遺伝子 / U6 snRNA遺伝子 / tRNA遺伝子 / 転写

研究概要

RNAポリメラーゼIII(Pol-III)は、5SrRNAやtRNAや一群のsnRNAを合成する重要な転写装置である。しかし、植物に於けるPol-IIIの転写機構の研究は皆無と言ってよい。そこで、本研究では、タバコBY-2培養細胞の培養条件(培地組成、温度、光、時間など)を組織的に検討し、Pol-III活性の最も高い細胞を得て、さらに、核抽出液の調整法をステップごとに検討し、再現性よくPol-III活性の高い系の一般的調整法を確立することに成功した。この系は、タバコU6snRNAやU3snRNAの遺伝子を効率的に転写する。また、高等植物の各種tRNA遺伝子を高い活性で転写することを示した。今後、さらに長時間の保存性を検討し、また、転写活性とプロセシング活性を分けるべく部分精製を試みる。

研究成果

• [文献書誌] Watanabe,T., M.Sugita, M.Sugiura: "Identification of 10Sa RNA (tmRNA) homologues from the cyanobacterium Synechococcus sp.strain PCC6301 and related organisms." Biochim.Biophy.Acta. 1396. 97-104 (1998)
• [文献書誌] Miyagi,T., S.Kapoor, M.Sugita and M.Sugiura: "Transcript analysis of tobacco plastid rps2/atnI/H/F/A operon reveals the existence of a non-consensus type (NCII) promoter upstream to atpI coding sequence." Mol.Gen.Genet.257. 299-307 (1998)
• [文献書誌] Akama,K., Y.Yukawa, M.Sugiura and I.Small: "Plant cytosolic tRNA^<His> possesses an exceptional C_<54> in the canonical TΨC loop." Nucl.Acids.Res.26. 2708-2714 (1998)
• [文献書誌] Hirose,T., T.Kusumegi and M.Sugiura: "Translation of tobacco chloroplast rps14mRNA depends on a Shine-Dalgarno-like sequence in the 5'-untranslated region but not on internal RNA editing in the coding region." FEBS Lett.430. 257-260 (1998)
• [文献書誌] Sugiura,M., T.Hirose and M.Sugita: "Evolution and mechanism of translation in chloroplasts." Annu.Rev.Genetics. 32. 437-459 (1998)
• [文献書誌] Sugiura, M.: "From plastid to cyanobacterial genomes." In The Phototrophic Prokaryotes. 印刷中. (1998)
• [文献書誌] Sugiura, M.: "The discovery of the complete sequence of tobacco and rice chloroplast genomes.In Discoveries in Plant Biology" World Scientific Publishing Co.Ltd, Hong Kong, 45-60 (1998)
• [文献書誌] Sugiura, M.: "Phytogene sequence : From cyanobacteia to plastids.In From Symbiosis to Eukaryotism-Endocytobiology VII" Univ Geneva Press, in press(印刷中), (1998)