| 研究概要 |
1. リソソームを蓄積したタバコ培養細胞を,オオムギのシステインプロテアーゼに対する抗体を用いた蛍光抗体法で染色して観察したが,このオルガネラにシステインプロテアーゼが局在することを示すシグナルは得られなかった。そこで,蛍光抗体法でプロテアーゼの局在を示すことをあきらめ,細胞分画を行った。リソソームを蓄積したタバコ細胞を破砕し,パーコール平衡密度勾配遠心によりリソソームの単離を行った。単離したリソソームより抽出したタンパク質を電気泳動で分離し,プロテアーゼの活性染色を行った結果,オルガネラ内にシステインプロテアーゼが存在することが証明できた。
2. ミトコンドリアを特異的に染色するMitotracker(Molecular probe)を用いて,タバコ培養細胞のミトコンドリアを染色した後に,自食作用を誘導し,リソソーム内にMitotarackerがi移動することを示した。この結果は,自食作用によってミトコンドリアがリソソームに取り込まれることを示唆していると考えられるが,まだ不明の点も残った。
3. ミトコンドリア移行シグナルを持つレポーター蛋白質(Green fluorescent protein)を,タバコ培養細胞で発現させ,自食作用を誘導した。その後,このレポータータンパク質がリソソームに取り込まれるかどうかを蛍光顕微鏡で解析しているが,再現性のある結果はまだ得られていない。
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