環境汚染物質によるウイルスの病原変異の可能性

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10876068
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 源 宣之 岐阜大学, 農学部, 教授 (10144007)
• 研究分担者: 杉山 誠 岐阜大学, 農学部, 助教授 (80196774)
• キーワード: 環境汚染物質 / GFP遺伝子 / リコンビナント・センダイウイルス / RNA変異原性 / ベンツピレン / p,p′-DDE / 変異GFP遺伝子

研究概要

本研究では、環境汚染化学物質による様々の影響を宿主側からではなく、ウイルス側から検討するために、リバース・ジェネッテクスにより緑色蛍光蛋白質(GFP)遺伝子を挿入したリコンビナントSendai virus(GFP/SeV)がウイルスによる変異原性試験に応用可能か否かを調べた。挿入GFP遺伝子に変異が起こると、そのウイルス感染細胞は緑色の蛍光を発しなくなり、ウイルス変異の検出を容易にする。これまでに以下の結果を得た。
1.環境汚染化学物質であるベンツピレン、4NQO、p.p′-DDE及びβ-HCHを用いて、GFP/SeVの変異をGFP発現抑制ウイルスプラックの検出で調べたが、変異ウイルス数は対照との間で差が無く、有意な変異を確認することが出来なかった。
2.GFP発現抑制ウイルスのGFP遺伝子を調べたところ、1アミノ酸変異によりGFPの発現が抑制されていた。
3.化学物質による変異を、GFP発現抑制ウイルスのGFP発現復帰を指標に検討した。各化学物質をウイルスと直接感作させたが変異は認められなかった。
4.化学物質存在下で培養された細胞にGFP発現抑制ウイルスを感染させ、増殖したウイルスの変異を確認中である。
5.化学物質で直接感作されたクローン化遺伝子とレポーター遺伝子挿入ミニゲノムの系を用いて、レポーター蛋白質の発現量から遺伝子の変異を直接検討中である。
これまでのところ、まだGFP/SeVの変異原性試験への応用は出来ていない。しかし、分子レベルの実験を継続する事により、応用可能になると考えている。

研究成果

• [文献書誌] Hoshi,H.,: "Organochlorine pesticides and polychlorinated biphenyl congeners in wild terrestrial mammals and birds from Chubu region, Japan : interspecies comparison of the residue levels and compositions."Chemosphere. 36(15). 3211-3221 (1998)
• [文献書誌] Luo,T.R.,: "Antigenic and functional analyses of glycoprotein of rabies virus using monoclonal antibodies."Microbiology & Immunology. 42(3). 187-193 (1998)
• [文献書誌] Goto,H.,: "Mapping of epitopes and structural analysis of antigenic sites in the nucleoprotein of rabies virus."Journal of General Virology. 81(1). 119-127 (2000)
• [文献書誌] Ito,N.,: "A comparison of complete genome sequences of the attenuated RC-HL strain of rabies virus used for production of animal vaccine in Japan, and the parental Nishigahara strain."Microbiolgy & Immunolgy. 45(1). 51-58 (2001)
• [文献書誌] 福原久江: "緑色蛍光蛋白質遺伝子組換えセンダイウイルス(GFP/SeV)を用いた環境汚染物質の変異原性検出の試み"第131回日本獣医学会. 2001年4月(発表予定).
• [文献書誌] 野沢真奈美: "緑色蛍光蛋白質遺伝子組換えセンダイウイルス(GFP/SeV)の変異体を用いた環境汚染物質の変異原性検出の試み"第132回日本獣医学会. 2001年10月(発表予定).