1998 年度実績報告書

発生工学的手法を用いた日と白血病モデルマウスの作製

研究課題

研究課題/領域番号	10877154
研究機関	東京大学
研究代表者	三谷絹子東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50251244)
研究分担者	小川誠司東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60292900) 本田浩章東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (40245064) 千葉滋東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60212049) 平井久丸東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (90181130)
キーワード	白血病 / t(11;19) / ノックアウト / ノックイン / 転写因子 / RNAポリメラーゼII伸長因子 / MLL / MEN / MEN
研究概要	ヒト白血病モデルマウスを作製する目的で、t(11;19)(q23;p13.1)の原因遺伝子MLL/MENのノックインマウスを作製している。129SVマウスgenomic libraryをヒトMLL遺伝子のプローブでスクリーニングし、マウス遺伝子を得た。第8エクソンの下流にMLL/MENに含まれるMEN部分のcDNAをin-frameで結合させた。さらにこの下流に、ポジティブ選別用のneomycin耐性遺伝子およびリコンビネーション用のマウスMLLの第8イントロンのゲノムを繋いだ。DTA遺伝子(ネガティブ選別用)を結合させて完成させたknock-in vectorをエレクトロポレーションによりES細胞に導入し、相同組み換え体選別に成功している。今後、得られたクローンをマウス受精卵の blastocystにinjectionし、キメラマウスを得、白血病発症の有無を観察する予定である。一方、MEN(RNAポリメラーゼII伸長因子)の生物学的機能を解析する目的でノックアウトマウスを作製している。129SVマウスgenomic libraryを、ヒトMEN遺伝子をプローブとしてスクリーニングし、マウス遺伝子を得た。マウス遺伝子の第1エクソンの中にneomycin耐性遺伝子を挿入し、さらに、DTA遺伝子をマウスゲノムに結合させてMEN knock-out vectorを完成させた。ES細胞に導入し、これらのDNAを抽出した。相同組み換え領域より5'側及び3'側のゲノムプローブ及びneo遺伝子プローブを用いてサザン解析を行うことにより、2クローンの相同組み換え体を選別し得た。morula aggregationによりキメラマウスを得ることに成功している。今後、交配によりペテロマウスを得、さらにヘテロマウスの交配によりホモマウスを作製する予定である。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Kurokawa M: "The oncoprotein Evi-1 represses TGF-β signalling by inhibiting Smad3." Nature. 394. 92-94 (1988)
[文献書誌] Tanaka K: "The AML1/ETO(MTG8)and AML1/Evi-1 leukemia-associated chimeric oncoproteins accumulate PEBP2beta(CBFbeta)in the nucleus more efficiently than wild-type AML1." Blood. 91. 1688-1699 (1988)
[文献書誌] Kanda Y: "Overexpression of the MEN/ELL protein,an RNA polymerase II elongation factor,results in transformation of Ratl cells with dependence on the lysine-rich region." J Biol Chem. 273. 5248-5252 (1988)
[文献書誌] Hosoya N: "Frameshift Mutations of the hMSH6 Gene in Human Leukemia Cell Lines." Japanese Journal of Cancer Research. 89. 33-39 (1988)
[文献書誌] Hosoya N: "Mutation analysis of the WT1 gene in myelodysplastic syndromes." Japanese Journal of Cancer Research. 89. 821-824 (1988)
[文献書誌] Kurokawa M: "The t(3;21)fusion product,AML1/Evi-1,interacts with Smad3 and blocks TGFβ-mediated growth inhibition of mveloid cells." Blood. 92. 4003-4012 (1988)
[文献書誌] 三谷、平井: "Annual Review血液1998" 中外医学社, 245 (1988)
[文献書誌] 三谷: "造血幹細胞-分子から臨床まで-" 南江堂, 272 (1988)

1998 年度 実績報告書

発生工学的手法を用いた日と白血病モデルマウスの作製

研究代表者

三谷 絹子 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50251244)

研究成果

[文献書誌] Kurokawa M: "The oncoprotein Evi-1 represses TGF-β signalling by inhibiting Smad3." Nature. 394. 92-94 (1988)

[文献書誌] Tanaka K: "The AML1/ETO(MTG8)and AML1/Evi-1 leukemia-associated chimeric oncoproteins accumulate PEBP2beta(CBFbeta)in the nucleus more efficiently than wild-type AML1." Blood. 91. 1688-1699 (1988)

[文献書誌] Kanda Y: "Overexpression of the MEN/ELL protein,an RNA polymerase II elongation factor,results in transformation of Ratl cells with dependence on the lysine-rich region." J Biol Chem. 273. 5248-5252 (1988)

[文献書誌] Hosoya N: "Frameshift Mutations of the hMSH6 Gene in Human Leukemia Cell Lines." Japanese Journal of Cancer Research. 89. 33-39 (1988)

[文献書誌] Hosoya N: "Mutation analysis of the WT1 gene in myelodysplastic syndromes." Japanese Journal of Cancer Research. 89. 821-824 (1988)

[文献書誌] Kurokawa M: "The t(3;21)fusion product,AML1/Evi-1,interacts with Smad3 and blocks TGFβ-mediated growth inhibition of mveloid cells." Blood. 92. 4003-4012 (1988)

[文献書誌] 三谷、平井: "Annual Review血液1998" 中外医学社, 245 (1988)

[文献書誌] 三谷: "造血幹細胞-分子から臨床まで-" 南江堂, 272 (1988)

1998 年度実績報告書

三谷絹子東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50251244)