新型豚由来H1N1ウイルスにおけるPB1-F2タンパク質の宿主への影響

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10J04699
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 高野 量 東京大学, 新領域創成科学研究科, 特別研究員(DC2)
• キーワード: インフルエンザ / PB1-F2タンパク質 / 質量分析 / インターフェロンβ / qRT-PCR / siRNAスクリーニング

研究概要

PB1-F2タンパク質発現ミュータントであるウイルスをリバースジェネティクス法により作出した.作出したウイルス株は全部で三種であり,一つは,90個のアミノ酸からなる野生型PB1-F2タンパク質を持つウイルス,一つは,新型ウイルスに見られるような11個のアミノ酸からなる変異型PB1-F2タンパク質を持つウイルス,もう一つは,PB1-F2を完全に欠損したウイルスである.
これらのウイルス学的特徴を調べるべく,三種のウイルスをヒト腎臓由来細胞株であるHEK293細胞に感染させ,遺伝子発現量の違いをqRT-PCR法により解析した.その結果,野生型PB1-F2を有するウイルス株は,それが短い・あるいは完全に欠損している変異体に比べて,有意にインターフェロンベータの発現を強く誘導することが判明した.
これと同時に,感染細胞内において,PB1-F2と相互作用する宿主因子を探索すべく,PB1-F2タンパク質を強制発現した細胞において免疫沈降を行った後,LC-MS質量分析器を用いて解析を行ったところ,90個の新規宿主タンパク質が同定された.
これらの知見より,PB1-F2タンパク質は,感染細胞において,インターフェロンベータを誘導する能力を有することが明らかになり,加えて,その誘導メカニズムに関与すると考えられる宿主側の因子を90個に絞り込むことに成功した.今後は,siRNAスクリーニングを用いて,どの宿主因子がPB1-F2によるインターフェロンベータの誘導能に関与しているか,詳細なメカニズムを解析することにより,新型ウイルスのPB1-F2タンパク質の機能解明へと発展させる.

研究成果

• [雑誌論文] Frequency of drug-resistant viruses and virus shedding in pediatric influenza patients treated with neuraminidase inhibitors. (2011)
  • 著者名/発表者名: Tamura D, Sugaya N, Ozawa M, Takano R, Ichikawa M, Yamazaki M, Kawakami C, Shimizu H, Uehara R, Kiso M, Kawakami E, Mitamura K, Kawaoka Y.
  • 雑誌名: Clinical Infectious Diseases 巻: 52(4) ページ: 432-437
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cytokine production by primary human macrophages infected with highly pathogenic H5N1 or pandemic HIN1 2009 influenza viruses. (2011)
  • 著者名/発表者名: Sakabe S, Iwatsuki-Horimoto K, Takano R, Nidom CA, Le MT, Nagamura-lnoue T, Horimoto T, Yamashita N, Kawaoka Y
  • 雑誌名: Journal of General Vimlogy 巻: 巻(号)未定(掲載確定)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pathogenicity of highly pathogenic avian H5N1 influenza A viruses isolated from humans between 2003 and 2007 in northern Vietnam. (2010)
  • 著者名/発表者名: Le QM, Ito M, Muramoto Y, Hoang PV, Vuong CD, Sakai-Tagawa Y, Kiso M, Ozawa M, Takano R, Kawaoka Y
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: 91(Pt10) ページ: 2485-2490
  • 査読あり
• [雑誌論文] A cross-reactive neutralizing monoclonal antibody protects mice from H5N1 and pandemic (H1N1) 2009 virus infection. (2010)
  • 著者名/発表者名: Sakabe S, Iwatsuki-Horimoto K, Horimoto T, Nidom CA, Le MQ, Takano R, Kubota-Koketsu R, Okuno Y, Ozawa M, Kawaoka Y
  • 雑誌名: Antiviral Research 巻: 88(3) ページ: 249-255
  • 査読あり
• [雑誌論文] The HA and NS genes of human H5N1 influenza A virus contribute to high virulence in ferrets. (2010)
  • 著者名/発表者名: Imai H, Shinya K, Takano R, Kiso M, Muramoto Y, Sakabe S, Murakami S, Ito M, Yamada S, Le MT, Nidom CA, Sakai-Tagawa Y, Takahashi K, Omori Y, Nods, T, Shimojima M, Kakugawa S, Goto H, Iwatsuki-Horimoto K, Horimoto T, Kawaoka Y.
  • 雑誌名: PLoS Pathogens 巻: 6(9) ページ: e1001106
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization of oseltamivir-resistant 2009 H1N1 pandemic influenza A viruses. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kiso M, Shinya K, Shimojima M, Takano R, Takahashi K, Katsura H, Kakugawa S, Le MT, Yamashita M, Furuta Y, Ozawa M, Kawaoka Y.
  • 雑誌名: PLoS Pathogens 巻: 6(8) ページ: e1001079
  • 査読あり
• [雑誌論文] Influenza A (H5N1) viruses from pigs, Indonesia. (2010)
  • 著者名/発表者名: Nidom CA, Takano R, Yamada S, Sakai-Tagawa Y, Daulay S, Aswadi D, Suzuki T, Suzuki Y, Shinya K, Iwatsuki-Horimoto K, Muramoto Y, Kawaoka Y.
  • 雑誌名: Emerging Infectious Diseases 巻: 16(10) ページ: 1515-1523
  • 査読あり
• [雑誌論文] 新型インフルエンザ(pdm H1N1 2009)ウイルス (2010)
  • 著者名/発表者名: 高野量, 河岡義裕
  • 雑誌名: PROGRESS IN MEDICINE 巻: 第30巻9号 ページ: 17(2279)-21(2283)
• [学会発表] 亜型間交差中和抗体C179のH5N1高病原性鳥インフルエンザおよび2009年H1N1パンデミックウイルスに対する防御効果 (2010)
  • 著者名/発表者名: 坂部沙織, 岩附研子, 堀本泰介, 高野量, 纐纈律子, 奥野良信, 河岡義裕
  • 学会等名: 第58回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 徳島県(郷土文化会館)
  • 年月日: 2010-11-09
• [学会発表] H5N1インフルエンザウイルス高病原性発揮のメカニズム (2010)
  • 著者名/発表者名: 今井博貴, 新矢恭子, 高野量, 木曽真紀, 村本裕紀子, 坂部沙織, 村上晋, 伊藤睦美, 山田晋弥, Mai Quynh Li, 坂井優子, 高橋慧, 大森康之, 野田岳志, 下島昌幸, 角川学士, 五藤秀男, 岩附研子, 堀本泰介, 河岡義裕
  • 学会等名: 第58回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 徳島県(郷土文化会館)
  • 年月日: 2010-11-08