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2010 年度 実績報告書

神経興奮性アミノ酸一斉光学分割法の開発と神経変性疾患の診断マーカー・治療標的探索

研究課題

研究課題/領域番号 10J07562
研究機関九州大学

研究代表者

三次 百合香  九州大学, 大学院・薬学府生体分析化学, 特別研究員(DC1)

キーワード神経興奮性アミノ酸 / 光学分割 / 神経変性疾患
研究概要

二次元HPLCを用いて神経興奮性アミノ酸(L-グルタミン酸、グリシン、D-セリン、D-アラニン)の高感度選択的一斉分析法を開発するため、分離条件の精査を行った。一次元目の逆相分離においては移動相中アセトニトリル濃度を検討し、0.05%トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル水溶液のグラジエント溶離を用いることによりセリン、グリシン、グルタミン酸及びアラニンが約60分で良好に分離した。また、二次元目の光学分割においてはSumichiral OA-2500Sを固定相とし、セリンは5mMクエン酸を含むメタノール/アセトニトリル(25/75)、アラニンは4mMクエン酸を含むメタノールアセトニトリル(50/50)、グルタミン酸は2.5mMクエン酸を含むメタノールアセトニトリル(25/75)で良好な光学分割が得られた。セリン、アラニン、グルタミン酸の分離度は各々2.33、2.70、2.08であり、いずれも良好な光学分割が達成された。以上の条件を用い、複数のアミノ酸画分をトラップ可能とするマルチループバルブを導入した二次元HPLC一斉分析法を開発した。本分析法の検出限界はインジェクト量当たり500amolであり、内在性微量D-セリン及びD-アラニンの高感度検出が達成された。神経興奮性アミノ酸を切り口とした精神・神経疾患の新規治療薬や診断マーカーの開発において血液及び尿に加えて脳脊髄液は主要なターゲットである。そこで、本法を用いてマウス血液、尿及び脳脊髄液の分析を検討した結果、神経興奮性アミノ酸が良好に定量可能であり、今後本法を用いて神経変性疾患の治療標的や診断マーカー探索への展開が期待される。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2011 2010

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (3件)

  • [雑誌論文] Simultaneous two-dimensional HPLC determinationo free D-serine and D-alanine in the brain and periphery of mutant rats lacking D-amino-acid oxidase2011

    • 著者名/発表者名
      Yurika MIYOSHI, et al.
    • 雑誌名

      Journal of Chromatography B

      巻: In press

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Simultaneous determination of D-aspartic acid and D-glutamic acid in rat tissuesand physiological fluids using a multi-loop two-dimensional HPLC procedure2011

    • 著者名/発表者名
      Hai HAN, et al.
    • 雑誌名

      Journal of Chromatography B

      巻: In press

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Brain-specific Phgdh deletion reveals a pivotal role for L-serine biosynthesis in controlling the level of D-serine, an N-methyl-D-aspartate receptor co-agonist, in adult brain2010

    • 著者名/発表者名
      Jung Hoon YANG, et al.
    • 雑誌名

      The Journal of Biological Chemistry

      巻: 285 ページ: 41380-41390

    • 査読あり
  • [学会発表] 神経活性アミノ酸光学異性体の二次元HPLC一斉分析法開発とマウス脳内含量解析2010

    • 著者名/発表者名
      三次百合香
    • 学会等名
      日本分析化学会第59年会
    • 発表場所
      東北大学(宮城県)
    • 年月日
      20100900
  • [学会発表] Development of a 2D-HPLC system for the simultaneous enantioselective determination of neuroactive amino acids2010

    • 著者名/発表者名
      Yurika MIYOSHI
    • 学会等名
      22^<nd> International Symposium on Chirality (ISCD-22 (Chirality 2010))
    • 発表場所
      Sapporo convention center, Japan
    • 年月日
      20100700
  • [学会発表] D-セリン及びD-アラニンの二次元HPLC同時分析法開発と哺乳類体内含量制御機構の解析2010

    • 著者名/発表者名
      三次百合香
    • 学会等名
      第28回九州分析化学若手の会夏季セミナー
    • 発表場所
      雲仙みかどホテル本館(長崎県)
    • 年月日
      20100700

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公開日: 2012-07-19  

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