診断の困難なイヌリンパ腫における新規臨床マーカーの開発

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10J40178
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 越野 裕子 (後藤 裕子) 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 特別研究員(RPD)
• キーワード: 犬 / リンパ腫

研究概要

1.蛍光プライマーとキャピラリー電気泳動を用いた免疫レセプター遺伝子再構成の検出
免疫レセプター遺伝子再構成の検出においては、従来ポリアクリルアミドゲルによる電気泳動が用いられてきた。この方法は比較的安価で特別な機器を必要としない一方、分解能に限界があり、非常に接近した複数のバンドを識別できない問題点がある。とくに腸のサンプルを用いた場合には不明瞭な結果が得られることがしばしばあり、判断が難しい。本研究では消化管型リンパ腫の確実な診断を行うため、蛍光プライマーとキャピラリー電気泳動を用いた検出方法を立ち上げた。この方法により、ポリアクリルアミドゲル電気泳動では不明瞭であったPCR結果を確実に判断できる。また、増幅産物の正確な長さを知ることができるため、PBMC中腫瘍細胞のモニタリングにも応用可能である。本研究の成果は現在、投稿準備中である。
2.リンパ腫組織のKi-67染色
増殖細胞マーカーの一種であるKi-67は様々な腫瘍において高い発現が認められることが知られているが、近年、イヌの多中心リンパ腫においても高い発現が報告された。この報告においてはhigh-gradeを主体とした多中心型リンパ腫の針吸引生検サンプルが対象となっていたが、本研究では対象を消化管型リンパ腫の内視鏡サンプルおよびlow-gradeリンパ腫細胞とし、診断の困難なこれら疾患の新規治療マーカーとしての可能性を模索することとする。現在、症例サンプルの収集および腸内視鏡サンプルの染色条件検討をおこなっており、良好な染色像が得られている。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

キャピラリー電気泳動を用いた免疫レセプター遺伝子再構成の検出に関しては、化学療法にて治療甲のリンパ腫症例から経時的にサンプリングすることにより、末梢血中に微量に存在する腫瘍細胞のモニタリングへの応用を示唆する結果を得ることができた。リンパ腫組織の染色に関しては、獣医病理学教室との共同研究により計画より多くの分子を対象として研究を行っている。

今後の研究の推進方策

免疫組織化学染色を継続し、Ki-67をはじめとする分子の発現状況をさらに検討する予定である。それぞれの抗体によって染色条件は異なるため、限られた生検組織を用いて効率よく染色する工夫をする。

研究成果

• [雑誌論文] Simultaneous Inactivation of the p16, p15 and p14 Genes Encoding Cyclin-Dependent Kinase Inhibitors in Canine T-Lymphoid Tumor Cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara-Igarashi A, Goto-Koshino Y, Mochizuki H, Maeda S, Fujino Y, Ohno K, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: J Vet Med Sci 巻: (Epub ahead of print)
  • DOI: 10.1292/jvms.12-0351
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analyses on Activation of NF-κB and Effect of Bortezomib in Canine Neoplastic Lymphoid Cell Lines. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kojima K, Fujino Y, Goto-Koshino Y, Ohno K, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: J Vet Med Sci 巻: (Epub ahead of print)
  • DOI: 10.1292/jvms.12-0168
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cytomorphological and Immunological Classification of Feline Lymphomas : Clinicopathological Features of 76 Cases. (2013)
  • 著者名/発表者名: Chino J, Fujino Y, Kobayashi T, Kariya K, Goto-Koshino Y, Ohno K, Nakayama H, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: J Vet Med Sci 巻: (Epub ahead of print)
  • DOI: 10.1292/jvms.12-0246
  • 査読あり
• [雑誌論文] The prognostic significance of minimal residual disease in the early phases of chemotherapy in dogs with high-grade B-cell lymphoma. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Yamzaki J, Goto-Koshino Y, Takahashi M, Fujino Y, Ohno K, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet J 巻: 195 ページ: 319-324
  • DOI: 10.1016/j.tvj1.2012.07.013
  • 査読あり
• [雑誌論文] Robo4 plays a role in bone marrow homing and mobilization, but is not essential in the long-term repopulating capacity of hematopoietic stem cells. (2012)
  • 著者名/発表者名: Goto-Koshino Y, Fukuchi Y, Shibata F, Abe D, Kuroda K, Okamoto S, Kitamura T, Nakajima 〓
  • 雑誌名: Plos One 巻: 7 ページ: e50849
  • DOI: 10.1371/joumal.pone.0050849
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of the expression of ABCB1 and LRP genes by MAPK/ERK pathway and its role in the generation of side population cells in canine lymphoma cell lines. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tomiyasu H, Watanabe M, Goto-Koshino Y, Fujino Y, Ohno K, Sugano S, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Leuk Lymphoma 巻: (Epub ahead of print)
  • DOI: 10.3109/10428194.2012.751529
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum amyloid A uptake by feline peripheral macrophages. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tamamoto T, Ohno K, Goto-Koshino Y, Fujino Y, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet Immunol Immunopathol 巻: 150 ページ: 47-52
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2012.08.005
  • 査読あり
• [雑誌論文] Increased expression of fractalkine and its receptor CX(3)CR1 in canine inflammatory bowel disease and their possible role in recruitment of intraepithelial lymphocytes. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda S, Ohno K, Nakamura K, Uchida K, Nakashima K, Fukushima K, Nakajima M, Goto-Koshino Y, Fujino Y, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet Immunol Immunopathol 巻: 148 ページ: 226-235
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2012.04.021
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of the antitumor effects of an MDM2 inhibitor, nutlin-3, in feline lymphoma cell lines with or without p53 mutation. (2012)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki H, Goto-Koshino Y, Sato M, Fujino Y, Ohno K,
  • 雑誌名: Vet Immunol Immunopathol 巻: 147 ページ: 187-194
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2012.04.017
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mucosal imbalance of interleukin-1βand interleukin-1 receptor antagonist in canine inflammatory bowel disease. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda S, Ohno K, Nakamura K, Uchida K, Nakashima K, Fukushima K, Tsukamoto A, Goto-Koshino Y, Fujino Y, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet J 巻: 194 ページ: 66-70
  • DOI: 10.1016/j.tvjl.2012.02.026
  • 査読あり
• [雑誌論文] X-Chromosome Inactivation Pattern Analysis for the Assessment of Cell Clonality in Cats. (2012)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki H, Goto-Koshino Y, Takahashi M, Fujino Y, Ohno K, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet Pathol 巻: 49 ページ: 963-970
  • DOI: 10.1177/0300985812439216
  • 査読あり
• [雑誌論文] GeneScan analysis to detect clonality of T-cell receptor γ gene rearrangement in feline lymphoid neoplasms. (2012)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki H, Nakamura K, Sato H, Goto-Koshino Y, Sato M, Takahashi M, Fukushima K, Nakashima K, Fuj ino Y, Ohno K, Uchida K, Nakayama H, Tsujimoto
  • 雑誌名: Vet Immunol Imunopathol 巻: 145 ページ: 402-409
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2011.12.015
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular cloning and expression analysis of the canine chemokine receptor CCR9. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda S, Ohno K, Tsukamoto A, Nakashima K, Fukushima K, Goto-Koshino Y, Fujino Y, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet Immunol Imunopathol 巻: 145 ページ: 534-539
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2011.12.004
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular cloning and characterization of canine fractalkine and its receptor CX(3)CR1. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda S, Ohno K, Nakashima K, Fukushima K, Tsukamoto A, Suzuki H, Fujiwara A, Goto-Koshino Y, Fujino Y, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet Immunol Imunopathol 巻: 145 ページ: 100-109
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2011.10.018
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quantification of chemokine and chemokine receptor gene express ion in duodenal mucosa of dogs with inflammatory bowel disease. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda S, Ohno K, Nakamura K, Uchida K, Nakashima K, Fukushima K, Tsukamoto A, Goto-Koshino Y, Fujino Y, Tsujimoto H.
  • 雑誌名: Vet Immunol Imunopathol 巻: 144 ページ: 290-298
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2011.08.020
  • 査読あり