新しい大腸癌抑制遺伝子ネットワークの解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11138201
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 守内 哲也 北海道大学, 医学部, 教授 (20174394)
• 研究分担者: 浜田 淳一 北海道大学, 医学部, 助教授 (50192703) ; 多田 光宏 北海道大学, 医学部, 講師 (10241316)
• キーワード: 自己免疫性大腸症 / AIE-75 / PDZドメイン / 酵母 / Wnt pathway / MCC

研究概要

我々は、小児の自己免疫性大腸炎(AIE)の自己抗原AIE-75のcDNAをクローニングしてこの蛋白が3つのPDZドメインを持つことを証明した。酵母two-hybrid法でAIE-75に結合するこの蛋白のcDNAの単離を行い、約20個のcDNAクローンを得た。今回の研究では、これらのcDNAがコードする蛋白がAIE-75を介してどのようなネットワークを形成しているかを明らかにすることを目的として研究を行った。AIE-75は主に腸、腎臓、膵臓で発現する新しいPDZドメイン蛋白である。この蛋白をbait として酵母two-hybrid法でplacentacDNAlibraryからMCC(mutated in colon cancer)癌抑制遺伝子のホモローグMCC-2をクローニングした。さらに、腎臓および大腸のcDNAライブラリーからWnt pathwayのkeyとなる複数の蛋白がクローニングされた(未公表)。そこで、AIE-75発現ベクターを種々の培養細胞株に導入してWnt pathwayに影響を与えるか否かを調べた。その結果、AIE-75を過剰発現させると核内にβ-cateninが増加する現象が観察された。この機序を解析するためにWnt pathwayを酵母内に再構成してAIE-75の機能を解析する実験を行った。その結果、現在知られているWnt pathwayの構成遺伝子だけでは酵母内にWnt pathwayを再構成することはできず、未知の蛋白が必要であることが判明した。そこでこの不完全Wnt pathway再構成酵母の系に酵母内発現cDNAライブラリーを導入してこの分子の単離を開始した。AIE-75はPDZドメインを介して細胞表面レセプターと細胞膜下の情報伝達分子を繋いでいると考えられる。

研究成果

• [文献書誌] 守内哲也: "Identification of an autoimmune enteropathy-related 75-kilodalton antigen"Gastroenterology. 117. 823-830 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers"Am.J.Pathlogy. (印刷中).
• [文献書誌] 守内哲也: "Dominant negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme"Cancer Res.. 59. 4765-4769 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "A functional and quantitative mutational analysis o p53 mutations in yeast indicates strand biases and different roles of mutations"Int.J.Cancer. 83. 700-705 (1999)
• [文献書誌] 多田光宏: "Deletion of the COOH-terminal region of p73 a enhances both its transactivation function and DNA-binding activity but inhibits induction of apoptosis in mammalian cells"Cancer Res. (印刷中).
• [文献書誌] 浜田淳一: "Increased E1AF expression in mouse fibrosarcoma promotes metastasis through induction of MT1-MMP expression"Oncogene. 18. 1771-1776 (1999)