肝特異的転写因子による肝臓幹様細胞(oval cell)の増殖・分化の制御機構

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11139206
• 研究機関: 秋田大学
• 研究代表者: 杉山 俊博 秋田大学, 医学部, 教授 (00127242)
• キーワード: 肝特異的転写因子 / 肝臓幹様細胞 / oval cell / HNF-1 / レチノイン酸 / EGF

研究概要

要約
肝特異的転写因子をトランスフェクションしてアルブミンを発現することが出来るかどうか、in vitro系で検討した。その結果、肝特異的転写因子をトランスフェクションした肝臓幹様細胞SD-SLC/HNF-1は、コラーゲンの2次元培養系ではアルブミンを合成できるようになるが、ここにレチノイン酸やEGFを添加するとアルブミン合成は抑制された。
結果
1)SD-SLCにHNF-1遺伝子導入して9株の永久株を樹立できた。一方、oval cellは導入後の増殖が悪いために現在のところ永久株は確立できなかった。そこで、本実験では樹立化に成功した3種のSD-SLC/HNF-1株を用いた。
2)SD-SLC/HNF-1は2次元細胞培養系でレチノイン酸を添加すると、アルブミン、AFP、HNF-4、γGTPのmRNA発現を減少させたが、一方C/EBPを増加させた。SD-SLC/HNF-1に対するEGFの効果は濃度依存性にアルブミンの発現を抑制した。ところが、コントロールSD-SLCに対してはEGFは最適濃度では発現増加を示した。
3)コラーゲンコート上(1次元培養系)でSD-SLC/HNF-1、SD-SLC/vectorのみ、SD-SLCの3種の細胞株を培養したとき、この順番でアルブミンが強く発現した。
考察
我々の樹立した細胞と従来報告されたoval cellと相違する点は、培養初期からアルブミン合成能がないことや肝細胞転写因子のうちHNF-3βしか発現していないことである。肝特異的転写因子をトランスフェクションしてアルブミンを発現することが出来るかどうか、in vitro系で検討した。その結果、肝特異的転写因子(HNF-1)をトランスフェクションした肝臓幹様細胞SD-SLC/HNF-1は、コラーゲンの2次元培養系ではアルブミンを合成できるようになるが、ここにレチノイン酸やEGFを添加するとアルブミン合成は抑制された。このことは、これらの因子は肝臓幹様細胞を脱分化する働きがあると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Nagai H.et al.: "Genomic DNA analyses of spontaneous hepatocellular carcinomas in LEC rat liver using a new technique"Oncology Report. 7. 315-318 (2000)
• [文献書誌] Komatsu M.et al.: "Cisplatin resistance conferred by copper transporting P-type ATPase cDNA(ATP7B)"Cancer Res.. (in press). (2000)
• [文献書誌] Harada M.et al.: "Wilson's disease gene product,ATP7B,localizes in the late endosomes in a human hepatoma cell line and normal rat hepatocytes : Participation in biliary copper"Gastroenterology. (in press). (2000)
• [文献書誌] Terada K.et al.: "Biliary expression of copper in LEC rat after introduction of copper transporting P-type ATPase,ATP7B"FEBS Lett.. 448. 53-56 (1999)
• [文献書誌] Terada K.et al.: "The Long-Evans Cinnamon rat : An animal model for Wilson's disease"Pediatr.Int.. 41. 414-418 (1999)
• [文献書誌] Watanabe I.et al.: "Detection of apoptotic cells in human colorectal by in situ methods : Antibody against single-stranded DNA and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end-labeling(TUNEL) methods. Jpn.J.Cancer Res.90 : 188-193,1999"Jpn.J.Cancer Res.. 90. 188-193 (1999)
• [文献書誌] Sugiyama,T.et al.: "Liver stem-like(oval)cells : isolation,differentiation and application for cell therapy. In ikada,Y.and Okano,T.ed. Tissue Engineering for Therapeutic USE"Elsevier Science B.V.. pp.161 (1999)