WT1特異的不死化細胞傷害性T細胞クローンを用いたヒト白血病の免疫遺伝子治療

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11140251
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 安川 正貴 愛媛大学, 医学部, 助教授 (60127917)
• 研究分担者: 薬師神 芳洋 愛媛大学, 医学部, 助手 (30294797) ; 酒井 郁也 愛媛大学, 医学部, 助手 (10205700)
• キーワード: 白血病 / 免疫遺伝子治療 / WT1 / 細胞傷害性T細胞 / HLA / Herpesvirus saimiri

研究概要

白血病の新たな免疫遺伝子治療の開発を目的に研究を行い、下記の研究成果を得た。
1)急性白血病ならびに慢性骨髄性白血病急性転化で高率に発現されるWT1のアミノ酸配列から、日本人の約60%が陽性であるHLA-A^*2402結合モチーフを同定した。2)このモチーフを有する9merペプチドを作製し、健常者末梢血単核球から誘導した樹状細胞(DC)にパルスし、自己CD8陽性T細胞をくり返し刺激した。この方法によって、WT1ペプチド特異的HLA-A24拘束性細胞傷害性T細胞クローンTAK-1を樹立した。3)TAK-1は、WT1を発現したHLA-A24陽性白血病細胞に対して特異的に細胞傷害性を示し、正常細胞には全く傷害性を示さなかった。4)健常者骨髄細胞の増殖にも全く影響は認められなかった。5)TAK-1を新世界猿のウイルスであるHerpesvirus saimiri(HVS)により不死化させた。HVS不死化TAK-1は、抗原刺激なくして長期間培養でき、本来のTAK-1同様の抗原特異性を示した。5)この不死化TAK-1に自殺遺伝子を導入する目的で、Herpes simplex virus-1由来thymidine kinase(tk)遺伝子を組み込んだレトロウイルスベクターを作製した。現在、このベクターを用いて不死化TAK-1にtk遺伝子を導入している。
以上の結果から、新たなヒト白血病特異的標的抗原が明らかとなり、自殺遺伝子を導入したHVS不死化細胞傷害性T細胞は、白血病に対する免疫遺伝子治療に有用であると考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Ohminami,H.,et al.: "Fas-independent and nonapoptotic cytotoxicity mediated by a human CD4+ T-cell clone directed against acute myelogenous leukemia-associated DEK-CAN"Blood. 93. 925-935 (1999)
• [文献書誌] Yasukawa,M.,et al.: "Latent infection and reactivation of human herpesvirus 6 in two novel myeloid cell lines"Blood. 93. 991-999 (1999)
• [文献書誌] Yasukawa,M.,et al.: "Down-regulation of CXCR4 by human herpesvirus 6 (HHV-6) and HHV-7"Journal of Immunology. 162. 5417-5422 (1999)
• [文献書誌] Yasukawa,M.,et al.: "Fas-independent cytotoxicity mediated by human CD4+ CTL directed against herpes simplex virus-infected cells"Journal of Immunology. 162. 6100-6106 (1999)
• [文献書誌] Ohminami,H.,et al.: "HLA class I-restricted lysis of leukemia cells by a CD8+ cytotoxic T-lymphocyte clone specific for WT1 peptide"Blood. 95. 286-293 (2000)
• [文献書誌] Yasukawa,M.,et al.: "Analysis of HLA-DRB1 alleles in Japanese patients with chronic myelogenous leukemia"American Journal of Hematology. 63. 99-101 (2000)