| 研究課題/領域番号 |
11217214
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| 研究機関 | 神奈川大学 |
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研究代表者 |
齋藤 光實 神奈川大学, 理学部, 教授 (80025717)
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| 研究分担者 |
小林 照幸 神奈川大学, 総合理学研究所, 客員研究員
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| キーワード | 生分解性 / 生分解性ポリエステル / ポリ-3-ヒドロキシ酪酸 / ポリヒドロキシアルカノエート / PHB / PHA / PHB分解酵素 / 嫌気 |
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| 研究概要 |
(1)Ralstonia eutrophaにおける細胞内PHB分解酵素の細胞PHBの蓄積に対する影響-Ralstonia eutrophaの細胞内PHB分解酵素遺伝子欠損株と細胞内3HB-oligomer hydrolase(OH)遺伝子欠損株ならびに両遺伝子を共に欠く欠損株を作製し、PHBの蓄積量を野生株と調べた。その結果PHB分解酵素遺伝子と3HB-OH遺伝子は細胞内のPHB分解に関与していることが推測された。(2)Ralstonia eutrophaにおける細胞内PHB分解酵素の性質-R. eutrophの細胞内PHB depolymerase遺伝子のC末端にHis tagを付けて大腸菌から大量に精製した。PCMBが活性を強く阻害したが、DFPは影響がなかった。基質として環状3HB trimerは分解しなかったが、3HB pentamerは環状、直鎖とも同程度分解した。このことから細胞内PHB分解酵素の分解様式はエンド型であると結論した。183番日のCysを部位特異的変異によりSerならびにAlaに置換した変異体を作製した。C183Aは活性が全くなく、183番日のCysが活性中心のアミノ酸であると結論した。(3)PHBとその関連化合物に働く加水分解酵素の基質特異性-Acidovorax sp. strain SA1の細胞内3HB-OH3HB-OH遺伝子を用いて直鎖状3HBオリゴマーと環状3HBオリゴマーに対する分解性を調べた。いずれも直鎖状のペンタマーを良く分解した。細胞外3HB-OHは環状基質よりも直鎖状基質を良く分解したのに対し、細胞外PHB分解酵素は環状基質の方を良く分解した。一方細胞内3HB-OHはどちらの基質も殆ど分解しなかった。これまで細胞外3HB-OHはエキソ型の酵素と考えられていたが、エンド型の酵素であることが分かった。
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