| 研究概要 |
申請者は、大腸菌染色体複製系において、DNAポリメラーゼが複製開始反応の制御因子としての機能を持つことを明らかにした(Cell,1998;EMBO J.,1999)。この系(RIDA;DnaA蛋白質の制御的不活性化)では、DNAポリメラーゼのβサブユニットがDNA上にロードされること(βクランプ形成)が複製開始反応の抑制のシグナルとなる。本年度は、(1)このβクランプによる複製開始装置の不活性化に必要な蛋白質(ldaB)が、新たに見い出された蛋白質Hdaであることが強く示唆された。またHdaがβクランプと直接結合することも明らかとなった。この発見はRIDAの素反応の解明のため、大変意義あるものである。現在、HdaとDnaA蛋白質との相互作用、Hdaの機能構造の解析等の研究を並行して進めている。また、RIDAに必要なDnaA蛋白質のアミノ酸残基を明らかにし、その構造上の特徴から素反応の機構を推定している(Mol.Microbiol.,印刷中)。(2)細胞周期を制御するためβクランプと相互作用する新規因子を生化学的に探索したところ、候補因子の存在を認めその精製を進めた。この因子はin vitroで再構成されたRIDAを特異的に阻害するため、細胞周期依存的にDnaA蛋白質の不活性化を阻害し、複製開始スイッチをONにする機能をもつ可能性がある。(3)染色体複製と細胞分裂との共役に関わる新規遺伝子の探索を進め、候補因子を見い出した。
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