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2002 年度 研究成果報告書概要

カイコキモトリプシンインヒビターの生理機能に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 11306005
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 蚕糸・昆虫利用学
研究機関九州大学

研究代表者

藤井 博  九州大学, 大学院・農学研究院, 教授 (10038268)

研究分担者 原 敏夫  九州大学, 大学院・農学研究院, 助教授 (50117222)
麻生 陽一  九州大学, 大学院・農学研究院, 助教授 (10117054)
河口 豊  九州大学, 大学院・農学研究院, 助教授 (80038306)
伴野 豊  九州大学, 大学院・農学研究院, 助教授 (50192711)
研究期間 (年度) 1999 – 2002
キーワードカイコ / Bombyx mori / キモトリプシンインヒビター(CI) / CI-bの精製 / CI-b1結合蛋白質 / 体液 / CI-13i遺伝子ゲノム解析 / CI-b1遺伝子ゲノム解析
研究概要

1.体液CIの遺伝子の構造と機能の解析:体液中に存在する16種類のCIのうち,Ict-H遺伝子に支配されているCI--b1は通常のゲル電気泳動では検出されないが、酸性ゲルで検出された。CI--b1はこれまでに明らかにされたCIに比べ塩基性のタンパク質であった。分離精製を行こない電気泳動的に均一な蛋白質として分離した。一方、CI-b1 CI-13の遺伝子をクローニングし、各々のcDNA塩基配列と遺伝子のゲノムの塩基配列を決定した。
CI-b1およびCI-13の遺伝子はともに2つのイントロンと3つのエクソンから構成されていた。CI-13とCI-b1の5'-franking領域を比べると、TATAとCCAAT boxes,さらに、NF-κB;CATA:C/EBP;CI-13はCOUP-TF/HNF-4:RORα1;SRY;HOXA3などの転写調節因子の結合部位が同定された。
しかしながら、翻訳開始コドンの上流293番目の塩基から約93塩基が欠失しており、したがって、CI-b1に存在しているNF-κB,CATA,C/EBP(抗菌物質誘導に関係する転写因子の結合部位である)領域が存在しなかった。CI-13の2つのイントロンにはBm1が各々1個づつ挿入されていた。しかし、CI-b1は、1つのイントロンにBm1が2つ挿入されていたが、他のイントロには挿入配列が認められなかった。以上の結果,CI-13とCI-b1は共にキモトリプシンを阻害するものの、生体内では機能的に異なった働きをしていると推察される。
2.CI-13と相互作用するタンパク質の検索:CII-13とCI-b1と相互作用するタンパク質を調べたところ、大腸菌及びLPSを注射したカイコ体液中にCI-B1と結合するタンパク質、31kDa,14kDaが誘導されることが明らかとなった。現在このタンパク質の精製を行っている。しかし、CI-13と反応するものは検出されなかった。
3.CI-13の卵内局在性:卵内のCI-13と反応する内在性プロテアーゼの検索を行ったところ、ゲル電気泳動でCI-13と同じ移動度にプロテアーゼを検出した。そこで、このプロテアーゼの精製を始めたが、酵素活性がきわめて弱く測定が困難であったので、活性測定のためのアッセイ系の確立を試みている。
4.CI-8レセプターの分離精製:リガンドアッセイ法を用いて、変態期における中腸組織に分子量60kDaのCI-8レセプターを見つけた。現在ゲルから切り出し、分離してN-末端分析に出しているが、微量のたために決定するに至っていない。

  • 研究成果

    (12件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (12件)

  • [文献書誌] Ujita M et al.: "Silkworm Bombyx mori 30-kDa lipoproteins specifically bind to glucose-containinig carbohydrates"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 66(10). 2264-2264 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Tabunoki H et al.: "Isolation, characterization, and cDNA sequence of a carotenoid-binding protein from the silk gland of Bombyx mori"J. Biol. Chem. 277. 32133-32140 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kawaguchi Y et al.: "Morphological variation of the mircopylar apparatus Bombyx mori egg"Journal of Insect Biotechnology and Sericology. 71(1). 55-59 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ota A et al.: "Cloning and characterization of testis-specific tectin in Bombyx mori"Comparative Biochemistry and Physiology B. 133. 371-382 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ohmura T et al.: "Molecular cloning, functional expression and mutagenesis of cDNA encoding Rye (secale cereale) seed chitinase-c"Biosci. Biotechnol. Biochem. 66(2). 277-284 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Meno K et al.: "Effects of guanidine hydrochloride on pyruvate dehydrogenase complex"J. Fac. Agr. Kyushu Univ. 46(1). 77-87 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ujita M., A.Kimura, D.Nishino, H.yokoyama, Y.Banno, H.Fujii, and A.Hara: "Silkworm Bombyx mori 30-kDa lipoprotein s specifically bind to glucose-containing carbohydrate."Biosci.Biotechnol.Biochem.. 66(10). 2264-2266 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Tabunoki H., H.Sugiyama, Y.Tanaka, H.Fujii, Y.Banno, Seina Jouni, M.Kobayashi, R.Sato, H.Maekawa, and K.Tsuchida: "Isolation, characterization, and cDNA sequence of a carotinoidobinding protein from the silk glands of Bombyx mori"J.Biochem.Chem.. 277(30). 32133-32140 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kawaguchi Y., T.Kusakabe, and K.Koga: "Morphological variation of micropylar apparatus in Bombyx mori"J.Insect Biotech.Sericol.. 71. 55-59 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Ohnuma T., M.Yagi, T.Yamagami, T.Taira, Y.Aso, and M.Ishiguro: "Molecular cloning, functional expression, and mutagenesis of cDNA encoding rye(Secale cereale) seed chitinase-c"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 66(2). 277284 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Ota A., T.Kusakabe, M.Takahashi, Y.Nakajima., Y.Kawaguchi, and K.Koga: "Cloning and characterization of testis-specific tectin in Bombyx mori"Comp.Biochem.Physiol.B.. 133. 371-382 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Meno K., Y.Aso, Y.Hiromasa, T.Irie, M.Kita, and M.Ishiguro: "Effects of guanidine hydrocholoride on pyruvate dehydrogeanase complex"J.Fac.Agr.Kyushu Univ.. 47(1). 77-87 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 2004-04-14  

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