| 研究課題/領域番号 |
11357006
|
|---|
| 研究機関 | 東京大学 |
|---|
研究代表者 |
山本 一彦 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (80191394)
|
|---|
| 研究分担者 |
沢田 哲治 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50235470)
土肥 眞 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60222155)
三崎 義堅 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (60219615)
|
|---|
| キーワード | T細胞レセプター / 免疫疾患 / 抗原特異的免疫療法 / 遺伝子導入 / 免疫細胞療法 |
|---|
| 研究概要 |
研究代表者らがすでに確立しているT細胞クロノタイプ検出法を発展させ、改変T細胞作成技術を確立し、マウスモデルにおいて抗原特異的免疫療法を行うことを目標とした。まず、自己免疫疾患の病変、移植臓器などに集積している抗原特異的T細胞クローンの状況を、そこから採取した少量のRNAから把握した上で、重要と考えられるクローンについて、T細胞レセプターの全塩基配列の情報を獲得する技術を確立し、次にこれらの遺伝子を自らのリンパ球に導入し抗原特異性を再構築することを目標とした。
具体的には自己免疫疾患モデルマウス(NZB/WF1)の脾臓細胞を単一浮遊細胞とした後、FICT標識の抗TCR-Vβモノクローナル抗体(クローナリティ分析にてドミナントに用いられたVβ)にて染色しFACSにて分析後、単一細胞への分別(ソート)を行い、96穴プレートの一つ一つに1つの陽性細胞を分離した。それぞれのウェルからRNAを抽出し、cDNAを合成ののち、既に決定している染色に用いた1種類のVβプライマーおよび通常のPCR用の20種類のVαプライマーとそれぞれのC領域プライマーで別々にPCR反応を行い増幅をおこなうことで、TCRのシグナルを増幅した。このようにクローニングされた2つのT細胞レセプター遺伝子cDNAの結合ペアの中から、別に既に解析しているリンパ球集団全体の中で集積しているクローンのペアを同定した。次にこれらの全長cDNAをクローニングしてレトロウイルスベクターに組み換えた。これらをNZB/WF1マウスの脾臓細胞に遺伝子移入したところ、ヌクレオソーム特異的であることが判明した。現在、さらに抑制性サイトカイン遺伝子も導入した改変T細胞を用いて、自己免疫疾患が抑制可能かを検討中である。
|
