| 研究課題/領域番号 |
11460135
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
基礎獣医学・基礎畜産学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
中山 裕之 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (40155891)
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| 研究分担者 |
鈴木 正寿 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (70302594)
尾崎 博 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (30134505)
西原 真杉 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (90145673)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2001
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| キーワード | ラット / 脳 / リボソームタンパク質L4(rpL4) / 細胞増殖 / アポトーシス |
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| 研究概要 |
PC12細胞を5-azacytidine(5AzC)で処置するとアポトーシスに先じてリボソームタンパク質L4(rpL4)が発現することが確認されている。本研究ではまず発生期のラット脳におけるrpL4の発現量と分布を検索した。胎仔〜生後14日の脳で細胞増殖活性の高い部位にrpL4 mRNAの顕著な発現が確認された。次に、妊娠13日目に5AzCを投与し、胎仔の脳におけるアポトーシスとrpL4 mRNAの発現の推移を経時的に検索した。アポトーシスは投与9から24時間後に観察されたが、この間rpL4 mRNAの発現量に変化は認められなかった。したがって、rpL4は出生前後の脳において、細胞増殖に関連した機能を持つことが示唆された。
5AzC投与ラット胎仔脳におけるP53、P21、bax、cyclin、G1、fasおよびgadd45の発現を、免疫組織化学およびRT-PCR法により検索した。またBrdUを用い、5AzC投与による神経上皮細胞増殖動態の変化をしらべた。TUNEL陽性アポトーシス細胞の発現のピークが12時間目であったのに対し、P53陽性細胞のそれは9時間目、P21陽性細胞のそれは12時間目であり、これら3者は同一の部位で観察された。さらに、RT-PCRによる検索では、対照群と比べ、P21(9〜24時間目)、bax(12時間目)、cyclin G1(9〜24時間目)、およびfas(9〜12時間目)の発現が顕著に上昇した。BrdU陽性細胞数(S期の細胞数)は投与後12時間目に5AzC投与群で顕著に減少し、G1期での細胞周期停止が示唆された。
さらにT-2トキシン、ethylnitrosourea(ENU)を胎仔に投与した際に生じる中枢神経系のアポトーシスについても、その発現メカニズムを検索した。
本研究の結果から、発生期の脳におけるrpL4 mRNA発現の詳細とこれを誘導する5AzCのDNA傷害メカニズムおよびそれによるアポトーシス誘導メカニズムの一端が明らかになった。老化期におけるこのような検索は現在進行中である。
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