発生工学的手法による原虫感染防御機構の分子免疫学的解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11460144
• 研究機関: 帯広畜産大学
• 研究代表者: 長澤 秀行 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (60172524)
• 研究分担者: 豊田 裕 帯広畜産大学, 名誉教授 (90050418) ; 五十嵐 郁男 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (80159582) ; 藤崎 幸蔵 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (00292095) ; 横山 峯介 三菱化学, 生命科学研究所, 室長 ; 鈴木 宏志 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (60333473)
• キーワード: 原虫病 / Toxoplasma gondii / Neospora caninum / Cryptosporidium parvum / トランスジェニックマウス / アポトーシス / 感染防御機構 / P0蛋白質

研究概要

当初の研究計画に従い、トキソプラズマ、バベシア、トリパノソーマ、ネオスポーラの免疫原性蛋白質を同定し、塩基配列の同定をおこなった。また、原虫抗原蛋白質をWestern blot法、間接蛍光抗体法、共焦点レーザー顕微鏡により同定するとともに、それぞれの抗体の中和活性を調べることにより、各蛋白質の原虫分化・増殖、細胞内侵入性、生存率に及ぼす影響を検討し、感染防御能機構への関与を解析した。
次に、既に保有している遺伝子改変マウス(トキソプラズマP30トランスジェニックマウス、IL-1ノックアウトマウス、IFNγノックアウトマウス、スカベンジャーレセプターノックアウトマウス、TNFαレセプターノックアウトマウス)に各種原虫を接種し、感染経過を野生型および免疫不全マウス(ヌードおよびスキットマウス)と比較検討することにより、感染防御機構の解明をおこなった。
その結果、感染防御免疫における抗原提示細胞の重要性、特にT細胞と抗原提示細胞の相互作用の上で、細胞表面抗原の発現が防御効果を左右する重要な要素となる可能性が示唆された。すなわち、T細胞に存在するCD28の発現は感染防御を誘導する免疫処置により変化しないのに対して、抗原提示細胞上のclassII、CD80およびCD86の発現がT細胞の活性化を誘導する事実が明らかとなった。また、細胞内寄生性の病原体においては、宿主細胞のアポトーシスが防御機構に重要である事実を明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Makala, L. H. C. et al.: "Comparison of the accessory activity of murine peritoneal cavity macrophage derived dendritic cells and peritoneal cavity macrophages in a mixed lymphocyte reaction"J. Vet. Med. Sci.. 63(12). 1271-1277 (2001)
• [文献書誌] Nishikawa, Y. et al.: "In the absence of endogenous gamma interferon, mice acutely infected with Neospora caninum succumb to a lethal immune response characterized by inactivation of peritoneal macrophages"Clin. Diagn. Lab. Immunol.. 8(4). 811-817 (2001)
• [文献書誌] Mishima, M. et al.: "Construction of recombinant feline herpesvirus type 1 expressing Toxoplasma gondii surface antigen 1"Mol. Biochem. Parasitol.. 117(2). 103-106 (2001)
• [文献書誌] Nishikawa, Y. et al.: "Expression of canine interferon-g by a recombinant vaccinia virus and its antiviral effect"Virus Res.. 75(2). 113-121 (2001)
• [文献書誌] Mishima, M. et al.: "Modified protection against Toxoplasma gondii lethal infection and brain cyst formation by vaccination with SAG2 and SRS1"J. Vet. Med. Sci.. 63(4). 433-438 (2001)
• [文献書誌] Makala, L. H. C. et al.: "Antigen presentation by murine peritoneal cavity macrophage-derived dendritic cells"Pathobiology. 69(2). 104-112 (2001)