動物細胞における細胞周期チェックポイント機構の解明

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470035
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 中西 真 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (40217774)
• キーワード: 細胞周期 / チェックポイント / Cdc25 / Chk1 / Cds1 / Cdc2 / 細胞分裂 / DNA傷害

研究概要

1.Chk1ノックアウトマウスの作製と解析
Chk1ヘテロ(Chk1^<+/->)マウスは見かけ上明らかな異常を認めなかったが、Chk1^<-/->マウスは胎生7.5日(E7.5)以前に致死であることがわかった。E3.5の桑実胚の解析から、胚内部の増殖の盛んな細胞に凝集して断片化した多数の微小核を認めた。また、Chk1^<-/->胚における細胞死の少なくとも一部はアポトーシスによるものであると思われた。Chk1^<+/+>あるいはChk1^<+/->胚においてはX線や紫外線、あるいはアフィディコリン処理によりMI値が大きく減少した。しかしながら、Chk1^<-/->胚ではMI値は未処理のものと同程度であった。これらの知見は、Chk1^<-/->胚においては、DNA傷害や複製阻害に反応したG2期での細胞周期停止機構が完全に損なわれており、Chk1がG2チェックポイント制御に必須な遺伝子であることを示していると考えられた。
2.Cds1(Chk2)ノックアウトマウスの作製と解析
Cds1(Chk2)ノックアウトマウスの胎生期での死亡は認められず、見かけ上明らかな異常を認めなかった。さらに、MEF細胞の解析からCds1(Chk2)-/-細胞はDNA傷害あるいは複製阻害に反応したG2期停止にほとんど異常を認めなかった。しかしながら、DNA傷害に反応したp53タンパク質の安定化と、それにともなうアポトーシス誘導が損なわれていた。これらの知見から、細胞内においてp53を介してアポトーシスを制御するキナーゼであると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Tojima,Y.: "NAK is an IκB kinase-activating kinase."Nature. 404. 778-782 (2000)
• [文献書誌] Takai,H.: "Aberrant Cell Cycle Checkpoint Function and Early Embryonic Death in Chk1^<-/-> Mice..,"Genes & Dev. 14. 1439-1447 (2000)
• [文献書誌] Yamamoto,A.: "Cyclin E as a coactivator of the androgen receptor."J.Cell Biol.. 150. 873-879 (2000)
• [文献書誌] Nagasawa,K.: "Identification and characterization of human DNA polmerase β2, a DNA polymerase β-related enzyme."J.Biol.Chem.. 275. 31233-31238 (2000)
• [文献書誌] Nakanishi,M.: "Identification and characterization of human Wee1B, a new member of the Wee1 family of Cdk-inhibitory kinases."Genes to Cells. 5. 839-847 (2000)
• [文献書誌] Satoh,T.: "Facilitatory roles of nevel compounds designed from cyclopentenone prostaglandins on neurie outgrowth-promoting acitivities of nerve growth factor."J.Neurochem.. 75. 1092-1102 (2000)
• [文献書誌] Akita,H.: "Induction of KAI-1 Expression in Metastatic Cancer Cells by Phorbol Esters."Cancer letters. 153. 79-83 (2000)
• [文献書誌] Fuse,T.: "p27^<Kip1> expression by contact inhibition as a prognostic index of human glioma."J.Neurochem.. 74. 1393-1399 (2000)
• [文献書誌] Takahashi,H.: "Cdk4 activation is dependent on the subunit rearrangement in the complexes."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 388-393 (2000)
• [文献書誌] Ogawa,K.: "Aberrant expression of p27^<Kip1> is associated with malignant transformation of the rat urinary bladder epithelium."Carcinogenesis. 21. 117-121 (2000)