パラミクソウイルスゲノムの転写機構:宿主因子の精製,同定と機能の解析

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470080
• 研究機関: 北里大学
• 研究代表者: 水本 清久 北里大学, 薬学部, 教授 (80092344)
• 研究分担者: 荻野 朝朗 東京大学, 医学部, 博士研究員(研究職) (80312213) ; 岩間 美奈子 北里大学, 薬学部, 助手 (10223421) ; 塚本 俊彦 北里大学, 薬学部, 助教授 (10236862)
• キーワード: センダイウイルス / マイナス鎖RNAゲノム / RNA依存RNAポリメラーゼ / ウイルスmRNA合成 / 宿主因子 / mRNAキャップ構造 / キャップメチル化酵素 / ウイルスLタンパク質

研究概要

パラミクソウイルス科センダイウイルス(SeV)のゲノムは約15kbの非分節マイナス鎖RNAからなる。ウイルスゲノムの転写は、ウイルスゲノムでコードされるRNA依存RNAポリメラーゼ(P, Lタンパク質)によって触媒されるが、転写反応にはこの酵素以外に宿主由来のタンパク質因子(宿主因子)の存在が必須である。我々は、SeVゲノム転写の分子機構を明らかにすることを目的に、宿主因子の精製とその機能解析を行っている。これまでに、精製ウイルス粒子を用いたin vitro転写反応による解析から、SeV mRNA合成には4つの宿主因子が必要であり、その内の3つについて、細胞骨格系タンパク質のチューブリン、解糖系酵素のホスホグリセリン酸キナーゼならびにエノラーゼであることを明らかにした。今年度は、1)残るもう一つの因子p28の部分アミノ酸配列を決定し、その同定を試みている。また、2)SeV mRNAはメチル化キャップ構造(m^7GpppAm)を有するが、その生合成機構とそれを触媒する酵素系は未だ同定されていない、まず、キャップメチル化酵素(mRNA(グアニン-7-)メチル基転移酵素)活性について検討し、(1)キャップメチル化酵素活性がウイルスRNP中に存在すること、(2)組換えL及びPタンパク質を調製したところ、Lタンパク質のみにその活性が認められ、(3)その活性にはPの添加は何ら影響を及ぼさないこと、(4)酵素活性にはRNAの塩基配列特異性が認められること等を明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Tsuji, K., Mizumoto.K., Yamochi, T., Nishimoto, I., Matsuoka M: "Differential effect of ik3-1/Cables on p53-and p73-induced cell death"J.Biol. Chem. 277. 2951-2957 (2002)
• [文献書誌] Radomski, N., Barreto, G., Kaufmann, C., Yokosuka, J., Mizumoto, K., Dreyer.C: "Interaction of S-adenosylhomocysteine hydrolase of Xenopus laevis with mRNA(guanine-7-)methyltransferase : Implication on its nuclear compartmentalisation and on cap methylation of hnRNA"Biochem. Biophys. Acta. 1590. 93-102 (2002)
• [文献書誌] Honda, A., Mizumoto, K., Ishihama, A: "Minimum molecular architectures for transcription and replication of the influenza"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99. 13166-13171 (2002)
• [文献書誌] Ochi, H., Horiuchi, I., Araki, N., Toda, T., Araki, T., Sato, K., Murai, H., Osoegawa, M., Yamada, T., Okamura, K., Ogino, T., Mizumoto, K., Yamashita, H., Saya, H., Kira, J: "Proteomic analysis of human brain identifies α-enolase as novel autoantigen in Hashimoto's encephalopathy"FEBS Letters. 528. 197-202 (2002)
• [文献書誌] Furukawa, T., Konishi, F., Shitoh, K., Kojima, M., Nagai, H., Tsukamoto.T: "Densely methylated MLH1 promoter correlates with decreased mRNA expression in sporadic colorectal cancers"Genes, Chromosomes & Cancer. 35. 1-10 (2002)
• [文献書誌] Furukawa, T., Konishi, F., Shitoh, K., Kojima, M., Nagai, H., Tsukamoto, T: "Evaluation of screening strategy for detecting hereditary nonpolyposis colorectal"Cancer. 94. 911-920 (2002)