Wht-シグナル伝達系分子を標的とした新しい大腸癌治療法の開発

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470126
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 柴田 浩行 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (50260071)
• 研究分担者: 石岡 千加史 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (60241577)
• キーワード: APC遺伝子 / β-Catenin

研究概要

H11-1.β-Cateninダウンレギュレーション用ベクター(β-DR)の作成による大腸癌の制御
β-DRを大腸癌細胞において高効率に発現させるプロモーターを選択するため、CMV、SRa、SV40の各プロモーターの下流にGFP蛋白質をつないで大腸癌細胞株DLD-1にリポフェクション法にて導入し、蛍光強度を比較した。各プロモーター間に著しい差違はなかったので、CMVの下流にAPC遺伝子の全長のcDNAをつないだものをリポフェクション法にて導入した。一部の細胞にアポトーシスによると思われる細胞死が誘導されたので、遺伝子導入の効率と殺細胞効果を見るためにLacZ遺伝子をマーカーとしてコトランスフェクションを行い、検討を行った。全長のcDNAをつないだ発現ベクターは10kbを越えるサイズとなるため、遺伝子導入の効率が低くなると考えられた。そこで、発現ベクターのサイズが小さくなるようにデザインした、APC遺伝子の1260-2056a.a.(core-APC)に相当するフラグメントを発現するβ-DRの作成も同時に行った。しかい、同ベクターでは、期待された殺細胞効果が認められなかった。これは、遺伝子産物であるcore-APCフラグメントの安定性に問題があると考えられ、現在、GSTなどとのフュージョンプロテインの形で、発現状態をチェックでき、より安定に発現が期待できるよう改良を図っている。
H11-2.大腸癌細胞特異的毒素産生ベクター(MYC-DT-A)による大腸癌の制御
大腸癌細胞においてシグナル伝達が亢進しているc-MYCへのシグナルを利用する大腸癌特異的キラーベクターを作成している。SV40プロモーターにc-MYC遺伝子の5'-プロモーター領域や転写因子であるTCF-4の結合領域であるTBEをそれぞれ2個、4個、6個タンデムでつなげたものを作成した。レポーター遺伝子としてGFPの蛍光強度をDLD-1に導入し、比較する予定。

研究成果

• [文献書誌] Shimada A. et al.: "The transcriptional activities of p53 and its homologue p51/p63: similarities and differences"Cancer Research. 59. 2781-2786 (1999)
• [文献書誌] Kato S. et al.: "Effects of p51/p63 missense mutations on transcriptional activities of p53 downstream gene promoters"Cancer Research. 59. 5908-5911 (1999)
• [文献書誌] Sunahara M. et al.: "Mutational analysis of p51A/TAp63 gamma, a p53 homolog, in non-small cell lung cancer and breast cancer"Oncogene. 18. 3761-3765 (1999)
• [文献書誌] Yamashita Y. et al.: "BRCAl mutation testing for Japanese patients with ovarian cancer in breast cancer screening"Breast Cancer Research and Treatment. 58. 11-17 (1999)
• [文献書誌] Bell D. et al.: "Common nonsense mutations in RAD52"Cancer Research. 59. 3883-3888 (1999)
• [文献書誌] Nichols KE. et al.: "Heterozygous germline ATM mutations do not contribute to radiation-associated malignancies atter Hodgikin's disease"Journal of Clinical Oncology. 17. 1259-1266 (1999)