1999 年度実績報告書

アポトーシス促進因子baxを用いたPTCA後再狭窄に対する遺伝子治療の可能性

研究課題

研究課題/領域番号	11470160
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	岐阜大学
研究代表者	藤原久義岐阜大学, 医学部, 教授 (80115930)
研究分担者	竹村元三岐阜大学, 医学部・附属病院, 講師 (40283311) 岡野幸雄岐阜大学, 医学部, 教授 (10177066)
キーワード	mouth muscle cells / apoptosis / bax mRNA / TUNEL / electron microscopy / DNA ladder
研究概要	本年度はラット培養平滑筋細胞およびマクロファージにbax遺伝子を導入し、アポトーシスが誘導出来るか否かを検討した。ラット培養平滑筋細胞(SMC)よりRNAを抽出し、RT-PCR法にてbax mRNAに相補的な塩基配列を持つbax cDNAを合成し、大腸菌内で増幅し、精製した。このbax cDNAをアデリウイルスに組み込み、bax遺伝子発現ベクターを作成した。このbax遺伝子をラット培養SMCおよびマクロファージに導入した。まず、bax mRNAおよびBax蛋白が増大することをノーザンブロット法およびウエスターン法で確認した。Bax遺伝子導入SMCおよびマクロファージではコントロールとしての非導入SMCやマクロファージに比較し、SMCおよびマクロファージの死が有意に増大した。このSMC死のメカニズムかアポトーシスかネクローシスかを鑑別するためにアポトーシスのマーカーであるTUNEL,DNA ladder,Taq-polymerase based in situligation法および電顕にて観察した。その結果、TUNEL陽性&Taq-polymerase based in situ ligation陽性のSMCやマクロファージの増大、DNA ladderの陽性化および電顕的にアポトーシスの所見(核クロマチンの半月状または三日月状の凝集、細胞のschrinkage、アポトーシス小体)が見られた。ネクローシスのマーカーであるPfu染色はコントロールのSMC&マクロファージと同様であった。これらは培養中のartifactと思われた。以上によりbax mRNA導入はSMCのアポトーシスを誘導することが明らかになった。次に上記bax mRNA導入によるアポトーシスSMCモデルにTNF-αを添加したところ、SMCのアポトーシスの増大が見られた。すなわちTNF-αはSMCのアポトーシスに対し相乗効果を示した。

研究成果

(5件)

すべてその他

すべて文献書誌 (5件)

[文献書誌] Hayakawa Y, et al.: "Apoptosis and overexpression of Bax protein and bax mRNA in smooth musde cells with in intimal hypeplasia of human radal ateies-Analysis using ateiovenous fistulas for hemodalysis"Arteriosclerosis Thrombosis Vascular Biology. 19(3). 2066-2077 (1999)
[文献書誌] Kumada H, et al.: "Hydrogen peroxide-inducedphospholipase D activation in human vascular smooth muscle cells"Biomed Res. 20(6). 87-98 (1999)
[文献書誌] Nakamura M, et al.: "Sudden pressure elevation can trigger acute muscle cell death of the heart and aotra"Atherosclerosis. 146(2). 25-32 (1999)
[文献書誌] Yokoya K, et al.: "Process of progression of coronary artery lesions from mild or moderate stenosis to moderate or severe stenosis"Circulation. 100(9). 903-909 (1999)
[文献書誌] Kanoh M, et al.: "Significance of myocytes with positive DNA in situ nick end-labelingin hearts with dilated cardimyopathy"Circulation. 99(6). 2757-2764 (1999)

1999 年度 実績報告書

アポトーシス促進因子baxを用いたPTCA後再狭窄に対する遺伝子治療の可能性

研究代表者

藤原 久義 岐阜大学, 医学部, 教授 (80115930)

研究成果

[文献書誌] Hayakawa Y, et al.: "Apoptosis and overexpression of Bax protein and bax mRNA in smooth musde cells with in intimal hypeplasia of human radal ateies-Analysis using ateiovenous fistulas for hemodalysis"Arteriosclerosis Thrombosis Vascular Biology. 19(3). 2066-2077 (1999)

[文献書誌] Kumada H, et al.: "Hydrogen peroxide-inducedphospholipase D activation in human vascular smooth muscle cells"Biomed Res. 20(6). 87-98 (1999)

[文献書誌] Nakamura M, et al.: "Sudden pressure elevation can trigger acute muscle cell death of the heart and aotra"Atherosclerosis. 146(2). 25-32 (1999)

[文献書誌] Yokoya K, et al.: "Process of progression of coronary artery lesions from mild or moderate stenosis to moderate or severe stenosis"Circulation. 100(9). 903-909 (1999)

[文献書誌] Kanoh M, et al.: "Significance of myocytes with positive DNA in situ nick end-labelingin hearts with dilated cardimyopathy"Circulation. 99(6). 2757-2764 (1999)

1999 年度実績報告書

藤原久義岐阜大学, 医学部, 教授 (80115930)