| 研究概要 |
[序論]本研究は、Cre-loxP系を応用することによりマウス心臓特異的にヒトIL-1α cDNAを過剰発現することにより、その発現に起因する心肥大の分子機構を解明することを最終目的とする。そのためには、CAG(cytomegalovirus enhancer/chicken β-actin promoter)-loxP/EGFP(enhanced green fluorescent protein)-CAT(chloramphenicol acetyltransferase)/loxP-IL-1α-IRES(internal ribosomal entry site)-lacZ transgene(CELIZ)を有するtransgenicマウス(Tg)系統とMHC(α-myosin heavy chain promoter)-Cre transgene(MHC-Cre)を有するTg系統とを作製し、その後、両者の掛け合わせにより、double Tgを作製する。このdouble Tgでは、MHC promoterの影響下、心臓特異的にCre蛋白が発現し、CELIZ transgene内のloxPで挟まれたEGFP配列を除去する。その結果、下流側のIL-1αがCAG promoterの影響を受け、IL-1αが心臓特異的に発現することにより、心肥大が誘発されると考えられる。尚、上記系がマウス初期胚で作動することは、CELIZ内のLIZ部分をlacZ遺伝子に置き換えた構築体CETZ-17transgeneを導入されたTgの解析から証明済み(Sato et al.,Mol.Reprod.Develop.53,34-44,2000)。
[結果/展望]
1)CELIZを受精卵へ顕微注入した結果、合計50匹程の出産仔が得られた。れらF0マウスの皮膚(特に耳内部の深部)をUV付き実体顕微鏡で観察することにより、CELIZ高発現系統を最終的に2系統得た。これらF0マウスからF1マウスを得た後、F1マウスに対し、EGFP発光を観察した結果、いずれの系統もCELIZをメンデル式に子孫へ遺伝することが判明した。
2)MHC-Cre導入マウスの作製を最初想定したが、別の目的の実験から既にCreを骨格筋、心臓、脳、膵臓、腎臓等様々な臓器で発現するMNCE Tgを作製していた。このMNCE TgとCELIZ Tgとを掛け合わせ、double Tg(これをMNCELIZと称する)を得た。このマウスでは、心臓を含むCreを発現する臓器には、全てlacZの発現があることがその基質であるX-Galによる組織化学的染色で判明した。lacZが発現するということは、その上流にあるIL-1αも発現しているということで、実際、RT-PCR法でその発現が確認された。MNCELIZの心臓については、目下、病理組織解析を急いでいるが、心肥大の兆候は今の所、見られない。おそらくIL-1αの発現が未だ低い可能性もある。また、遺伝的背景が絡んでいる可能性もある。そこで、新たにCELIZ高発現系統を作製すること、C3H/HeNマウスへのbackcrossingを目下実行中である。
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