遺伝性脳白質変性症の脳障害の分子機構とその遺伝子治療に関する基礎的研究

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470176
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 東京慈恵会医科大学
• 研究代表者: 衞藤 義勝 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (50056909)
• 研究分担者: 津田 隆 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (50188554) ; 大橋 十也 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (60160595) ; 井田 博幸 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (90167255) ; 黒沢 健司 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (20277031) ; 長谷川 頼康 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (60256435)
• キーワード: MLD / 遺伝子異常 / Sjogren-Larsson / Twitcherマウス

研究概要

1)日本人MLD11例22alleleの遺伝子異常をPCR、SSCP、Sequenceによって検索を行った。その結果22allele中18の遺伝子異常をあきらかにした。またfatty acid dehydrogenaseの活性低下を示す日本人Sjogren-Larsson患者4例の遺伝子異常を同様の方法で検索し全てのalleleでの遺伝子異常を発見した。この内4つの変異は未報告のものであった。
2)Twitcherマウスの脳内サイコシンをのTOF-MASにて分析を試みた。しかしながら抽出法の不備が原因かサイコシンを検出できなかった。今後は高速液体クロマトグラフィーなどを用いたり、抽出法などを検討する予定である。
3)Twitcherマウス由来のシュワン細胞での各病期での脳組織での細胞内カルシウム動態をFura-2で測定した。本シュワン細胞は株化しておりTwitcherマウスより樹立された唯一の神経系細胞であり、今後Twitcherの神経系細胞の細胞内カルシウム代謝をFura-2法によ定量測定したり細胞膜IP3,PKC,細胞内プロテアーゼ活性更にはカスケードに関与するセカンドメセンジャーをmRNAレベルで検討する予定である。
4)脳障害の遺伝子治療に関してはTwitcherマウスの欠損酵素であるgalactocerebrosidaseを発現するアデノウイルスベクターの作成に成功した。今後、マウス尾静脈より注入し、マウス腎、肝、脳組織での遺伝子治療効果を検討する。

研究成果

• [文献書誌] Eto Y., Ida H.: "Clinical and molecular Characteristics of Japanese Gaucher Disease."Neurochem Res. 10. 2673-2678 (1999)
• [文献書誌] Ohashi T., Yokoo T., Eto Y., et al.: "Eduction of Lysosomal storage in Murine Mucoplysaccharidosis・・・"Blood. (in press). (2000)
• [文献書誌] Watabe K., Ohashi T., Eto Y., et al.: "Rescue of lesioned adult rat spinal motoneurons by・・・"Journal of Neuroscience Research. (in press).
• [文献書誌] Ida H., Rennert OM., Eto Y., et al.: "Clinical and genetic studies of Japanese homozygotes for the・・・"Hum Genet. 105. 120-126 (1999)
• [文献書誌] Oishi K., Ida H., Eto Y., et al.: "Clinical and molecular of Japanese patients with neuronal・・・"Molecular Genetics and Metabolism. 66. 344-348 (1999)
• [文献書誌] Yokoo T., Ohashi T., Eto Y., et al.: "Prophyaxis of Antibody-Induced Acute Glomerulonephritis・・・"Hum Gene Ther. 10. 2673-2678 (1999)