| 研究課題/領域番号 |
11470184
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 杏林大学 |
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研究代表者 |
塩原 哲夫 杏林大学, 医学部, 教授 (10118953)
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| 研究分担者 |
早川 順 杏林大学, 医学部, 助手 (30255393)
水川 良子 杏林大学, 医学部, 助手 (50301479)
寺木 祐一 杏林大学, 医学部, 講師 (10188667)
成松 久 創価大学, 生命研, 教授 (40129581)
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| キーワード | Fucosyl transferase VII / CLA / Th1細胞 / 免疫組織化学 / CD4^+T細胞 / CD8^+T細胞 |
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| 研究概要 |
本年度はCLA発現を制御している糖転移酵素であるFucosyl transferase VII(Fuc-TVII)の発現について、主に我々が樹立したmAb(KM1939)を用いて解析を行った.
1.主に免疫組織化学を用いて、様々な細胞株におけるFuc-TVIIとCLAの発現を検討した.CLAを恒常的に発現しているHL60,Namalwa/Fuc-TVIIでは、Fuc-TVIIの著明な発現が確認された.共焦点レーザー顕微鏡を用いた二重染色により、CLAは細胞膜に、Fuc-TVIIは細胞質のゴルジ領域に存在が確認された.
2.正常人末梢血リンパ球(PBMC)中のCLA、Fuc-TVIIの発現を検討したところ、T細胞、単球に両者の発現が確認された.しかし細胞株の結果と異なり、両者の発現はT細胞では必ずしも一致しない結果となった.そこで、PBMCよりCD4^+T細胞、CD8^+T細胞を分離し、それらのCLA、Fuc-TVIIの発現を比較検討した.CD4^+T細胞ではCLA陽性細胞の40%強がFuc-TVII^+であり、CD8^+T細胞では40%弱がFuc-TVII^+であった.CLA^+Fuc-TVII^+細胞はCD4^+T細胞中の9%、CD8^+T細胞中の4%を占めた.末梢血T細胞におけるCLAの発現とFuc-TVIIの発現のkineticsには、差があるものと考えられた.
3.Th1細胞の発現するFuc-TVIIに対してサイトカインが与える影響をみるために、PBMCよりナイーブT細胞を分離後、IL-12の環境下で、αCD3刺激を繰り返しTh1細胞を得た.このようにして得られたTh1細胞のCLA発現に対して、IL-4やIL-12がどのような影響を与えるかの検討を行った.IL-4添加はFuc-TVIIのタンパクレベル、mRNAレベルでの発現を著明に抑制したのに対し、IL-12添加はFuc-TVIIの発現を亢進させた.
4.今後は、Th2、Tc1、Tc2細胞におけるCLA発現に対し、上記のサイトカインはどのような影響を与えるかを明らかにしたいと考えている.
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